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熒光酶標(biāo)儀與光吸收酶標(biāo)儀原理及區(qū)別

閱讀:910      發(fā)布時(shí)間:2019-1-4
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熒光酶標(biāo)儀原理
  由光源氙弧燈發(fā)出的光通過(guò)切光器使其變成斷續(xù)之光以及激發(fā)光單色器變成單色光后,此光即為熒光物質(zhì)的激發(fā)光,被測(cè)的熒光物質(zhì)在激發(fā)光照射下所發(fā)出的熒光,經(jīng)過(guò)單色器變成單色熒光后照射于測(cè)樣品用的光電倍增管上,由其所發(fā)生的光電流經(jīng)過(guò)放大器放大輸至記錄儀,激發(fā)光單色器和熒光單色器的光柵均由電動(dòng)機(jī)帶動(dòng)的凸輪所控制,當(dāng)測(cè)繪熒光發(fā)射光譜時(shí),將激發(fā)光單色器的光柵,固定在*適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)光波長(zhǎng)處,而讓熒光單色器凸輪轉(zhuǎn)動(dòng),將各波長(zhǎng)的熒光強(qiáng)度訊號(hào)輸出至記錄儀上,所記錄的光譜即發(fā)射光譜。
  當(dāng)測(cè)繪熒光激發(fā)光譜時(shí),將熒光單色器的光柵固定在*適當(dāng)?shù)臒晒獠ㄩL(zhǎng)處,只讓激發(fā)光單色口的凸輪轉(zhuǎn)動(dòng),將各波長(zhǎng)的激發(fā)光的強(qiáng)度訊號(hào)輸出至記錄儀,所記錄的光譜即激發(fā)。
  當(dāng)進(jìn)行樣品溶液的定量分析時(shí),將激發(fā)光單色器固定在所選擇的激發(fā)光波長(zhǎng)處,將熒光單色器調(diào)節(jié)至所選擇的熒光波長(zhǎng)處,由記錄儀得出的信號(hào)是樣品溶液的熒光強(qiáng)度。
光吸收酶標(biāo)儀原理
  光是電磁波,波長(zhǎng)100nm~400nm稱(chēng)為紫外光, 400nm~780nm之間的光可被人眼觀(guān)察到,大于780nm稱(chēng)為紅外光。光吸收酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下,檢測(cè)被測(cè)物吸光值。 
  光通過(guò)被檢測(cè)物,前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,特定波長(zhǎng)下,同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
       在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng),在此波長(zhǎng)下,此物質(zhì)能夠吸收*多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段,就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),稱(chēng)為測(cè)量波長(zhǎng)。
  但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng),以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下,檢測(cè)物光的吸收*小。酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

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