21
當前位置：青島普仁儀器有限公司>>技術文章>>說說色譜分離柱再生的兩種方法
說說色譜分離柱再生的兩種方法
色譜分離柱長時間使用后，造成柱入口樹脂損失，使死體積增大，分離度降低；長時間未使用的色譜分離柱樹脂床進入空氣會使樹脂產(chǎn)生溝流，造成分離度降低，同時造成離子色譜峰分叉。這些現(xiàn)象均造成定量結果的誤差。因此，離子色譜峰形一旦有變化，就要重新繪制標準曲線。
色譜分離柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團，這些帶電基團通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結合。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質(zhì)量作用定律，這些離子將與結合在固定相上的反離子進行交換。
色譜分離柱是蛋白純化技術中常用的一種純化方法，其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結合，這種帶電分子與固定相之間的結合作用是可逆的，在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時，離子交換劑上結合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同，其與離子交換劑的結合能力也不同，所以被洗脫到溶液中的順序也不同，從而被分離出來。
色譜分離柱的再生方法有兩種：
?。?）先用25ml蒸餾水通過柱子以除去緩沖鹽類，再用25ml甲醇沖洗，以除去由于分配效應而殘存在骨架中的雜質(zhì)，再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類，后用緩沖液平衡。
（2）先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌，然后用水洗滌（不要用堿性溶液，以防硅膠基質(zhì)溶解），后用緩沖液平衡。