植物組織直接PCR試劑盒檢測(cè)原理

產(chǎn)品用途

本試劑盒采用*的裂解緩沖液裂解組織(新鮮、凍存組織)，所得裂解物無(wú)需純化即可作為模板，用抗抑制的2×Super direct PCR Taq Mix進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物可直接點(diǎn)樣電泳。

產(chǎn)品特點(diǎn)

· 直接以裂解物為模板進(jìn)行PCR，適用于樣品高通量篩選。

· 擴(kuò)增片段<2 kb 。

適用范圍

非多糖、多酚植物。

操作步驟

請(qǐng)?zhí)崆皽?zhǔn)備95℃的水浴或金屬浴。

A：基因組DNA提取

1、取5 mg或0.5 cm2左右的植物組織樣品，剪碎后加入50µl Buffer P1，吹吸或渦旋混勻。（注意：切勿加入過(guò)量葉片組織，以便酶解反應(yīng)更順利進(jìn)行）。

2、95℃水浴或金屬浴孵育10分鐘。

3、加入50µl Buffer P2,混勻后直接作為模板進(jìn)行PCR或置于4℃或-20℃保存。

B：PCR擴(kuò)增

注意事項(xiàng)

· 樣品避免反復(fù)凍融。

· 使用時(shí)試劑*化凍、混勻。

· 對(duì)于不易裂解組織(如蠟質(zhì)葉片)，可以延長(zhǎng)95℃的孵育時(shí)間至30分鐘。

· 如擴(kuò)增條帶較弱，可適當(dāng)增加模板用量或PCR循環(huán)數(shù)(不宜超過(guò)40個(gè)循環(huán))。

· 如非特異擴(kuò)增較多，可調(diào)整退火溫度或適當(dāng)增減模板用量。

· 提取物4℃可保存三個(gè)月，-20℃可保存六個(gè)月（避免反復(fù)凍融）。