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和元李記(上海)生物技術(shù)...

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PEI轉(zhuǎn)染試劑常見問(wèn)題

閱讀:6009      發(fā)布時(shí)間:2018-1-19
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QC4058L1080C4058L1090有什么區(qū)別?

A我們有兩種,80是針對(duì)線性的,90是支鏈轉(zhuǎn)染,比如慢性病包試劑用90比較好。  

Q李記細(xì)胞轉(zhuǎn)染液PEI固體自行配制溶液相比的優(yōu)勢(shì)在哪里?

A很多客戶買固體很難把握的,固體非常不容易溶解,包裝比較大,用的不多建議您選液體的,已做無(wú)菌處理,可以直接使用。

Q接種細(xì)胞,必須用膠原酶消化?胰酶不能用么?

A膠原酶從細(xì)菌中提取出來(lái)的酶,對(duì)膠原有很強(qiáng)的消化作用,適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用,對(duì)細(xì)胞本身影響不大,可使細(xì)胞與膠原成分脫離但不受傷害。膠原酶消化的不是細(xì)胞表面,而是細(xì)胞間質(zhì)。

         胰酶消化作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽腱,除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細(xì)胞骨架,從而使細(xì)胞分離。對(duì)細(xì)胞有輕微影響,進(jìn)而影響后續(xù)轉(zhuǎn)染效率及細(xì)胞活性,在一定程度上體現(xiàn)為轉(zhuǎn)染試劑的毒性

Q使用方法提到,轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)將復(fù)合物(40ul質(zhì)粒稀釋液+40ul 轉(zhuǎn)染試劑稀釋液)滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。此時(shí)含細(xì)胞的培養(yǎng)皿里面有含血清的培養(yǎng)基么?如果有,體積是多少?以24孔板為例,是0.5ml么?

A培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基成分為正常培養(yǎng)細(xì)胞的成分,原來(lái)培養(yǎng)時(shí)有血清,那就有。培養(yǎng)孔中培養(yǎng)液的體積也是正常情況,你說(shuō)的對(duì),如果是24孔板,那么體積應(yīng)該是0.5ml

Q:轉(zhuǎn)染細(xì)胞步驟中提到,去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液之后呢?要加含血清的培養(yǎng)基么?加多少,以24孔板為例?加完培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)?培養(yǎng)多久?

A:去除含復(fù)合物的培養(yǎng)基,過(guò)程是逐步的,有兩個(gè)目的,一是盡可能提高轉(zhuǎn)染效率,二是盡可能降低細(xì)胞毒性。減少EZ Trans-DNA復(fù)合物的過(guò)程,也是恢復(fù)到細(xì)胞正常培養(yǎng)基成分的過(guò)程。后續(xù)培養(yǎng)多久,說(shuō)明書為建議時(shí)間,你可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)摸索,要根據(jù)你的轉(zhuǎn)染效率,基因表達(dá)情況確定。

Q:轉(zhuǎn)染細(xì)胞步驟中提到,這里的7h,指的是去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液換成含血清的培養(yǎng)基之后的7h,還是指加入復(fù)合物后轉(zhuǎn)染7h?- 同樣的,“24-48小時(shí)內(nèi)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率”指的是去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液換成含血清的培養(yǎng)基之后的24-48h,還是指加入復(fù)合物后轉(zhuǎn)染24-48h

A:所有時(shí)間都是從EZ Trans-DNA復(fù)合物與細(xì)胞接觸開始.

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