Nature子刊重磅！LILRB4抗體讓白血病細(xì)胞“現(xiàn)形“

時(shí)間：2025/7/10閱讀：95

急性髓系白血病（AML）作為惡性程度最高的血液腫瘤之一，其對(duì)傳統(tǒng)化療及免疫治療的耐藥性問題長期困擾臨床。近年研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞通過劫持免疫檢查點(diǎn)分子實(shí)現(xiàn)"免疫逃逸"，但針對(duì)AML的特異性免疫抑制機(jī)制仍存在巨大認(rèn)知盲區(qū)。本研究首-次揭示，LILRB4/APOE信號(hào)軸通過重構(gòu)腫瘤微環(huán)境，形成"免疫沉默-代謝重編程"雙重防御體系，為AML精準(zhǔn)治療開辟全新路徑。

null

本研究首-次揭示LILRB4通過"配體-受體-信號(hào)-效應(yīng)"四層架構(gòu)調(diào)控AML免疫逃逸與轉(zhuǎn)移，提出"免疫抑制-代謝重編程"雙軌機(jī)制假說。靶向LILRB4的抗體療法在臨床前模型中展現(xiàn)出高效低毒特性，為單核細(xì)胞AML精準(zhǔn)治療提供新策略。相關(guān)成果已申請(qǐng)國際專-利（PCT/US2016/020838），并與Immune-Onc Therapeutics公司達(dá)成轉(zhuǎn)化合作。

研究方法

1. 臨床樣本分析

利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析LILRB4 mRNA表達(dá)水平與AML患者預(yù)后的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)與生存期縮短顯著相關(guān)。
流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證LILRB4在單核細(xì)胞AML（FAB M4/M5亞型）中特異性高表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，且高于正常單核細(xì)胞。

null

2. 功能驗(yàn)證

體外實(shí)驗(yàn)：通過CRISPR/Cas9構(gòu)建LILRB4敲除細(xì)胞系（lilrb4-KO），結(jié)合野生型（WT）及回補(bǔ)細(xì)胞（lilrb4-KO-wt），利用Transwell共培養(yǎng)體系評(píng)估T細(xì)胞增殖抑制能力。
體內(nèi)模型：建立人源化免疫缺陷小鼠（NSG）及同源小鼠（C57BL/6）異種移植模型，通過皮下注射或靜脈移植LILRB4敲除/過表達(dá)的AML細(xì)胞，監(jiān)測(cè)腫瘤生長及T細(xì)胞浸潤情況。

3. 機(jī)制解析

配體鑒定：通過蛋白液相色譜（FPLC）、質(zhì)譜（MS）及表面等離子共振（SPR）技術(shù)篩選并驗(yàn)證APOE為LILRB4特異性配體，結(jié)合常數(shù)（KD）為210 nM。
信號(hào)通路分析：采用Western blot、免疫沉淀（Co-IP）及RNA測(cè)序（RNA-seq）探究下游信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)LILRB4通過SHP-2磷酸化激活NF-κB通路，誘導(dǎo)uPAR及ARG1表達(dá)。
功能挽救實(shí)驗(yàn)：通過外源性補(bǔ)充APOE、uPAR或ARG1，驗(yàn)證其對(duì)T細(xì)胞抑制及腫瘤浸潤的調(diào)控作用。

研究結(jié)果

1. LILRB4表達(dá)與AML預(yù)后及免疫抑制密切相關(guān)

TCGA數(shù)據(jù)顯示，LILRB4高表達(dá)組患者總生存期顯著縮短（HR=2.34, p=0.0003），且其表達(dá)水平與T細(xì)胞耗竭標(biāo)志物（PD-1、TIM-3）呈正相關(guān)。
體外共培養(yǎng)證實(shí)，LILRB4+ AML細(xì)胞通過胞內(nèi)段傳遞抑制信號(hào)，顯著降低CD8+ T細(xì)胞增殖及IFN-γ分泌能力。

2. LILRB4通過APOE介導(dǎo)的信號(hào)軸調(diào)控T細(xì)胞抑制與腫瘤浸潤

配體結(jié)合：APOE通過其N端結(jié)構(gòu)域與LILRB4的Ig樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合，激活下游SHP-2磷酸化（p-Y580），進(jìn)而促進(jìn)NF-κB入核，上調(diào)uPAR及ARG1表達(dá)。
功能依賴性：LILRB4敲除顯著抑制THP-1細(xì)胞的跨內(nèi)皮遷移能力（p<0.01），而APOE或uPAR回補(bǔ)可部分恢復(fù)其侵襲表型。

3. 靶向LILRB4的治療潛力

體內(nèi)驗(yàn)證：抗LILRB4抗體（Fc工程化改造以降低ADCC效應(yīng)）顯著抑制AML異種移植瘤生長（腫瘤體積減少67%，p<0.001），并延長荷瘤小鼠生存期（中位生存期從28天延長至45天）。
免疫重塑：抗體治療促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中CD8+ T細(xì)胞浸潤（浸潤指數(shù)↑3.2倍），并增強(qiáng)其殺傷活性（顆粒酶B+ T細(xì)胞比例↑40%）。
安全性評(píng)估：正常造血干細(xì)胞（CD34+）表面LILRB4表達(dá)極低（MFI=12±3 vs. AML細(xì)胞MFI=120±15），抗體處理未影響人源化小鼠骨髓重建效率。

ATHENS為本研究所提供的產(chǎn)品

Athens Research & Biotechnology為本研究提供了多種APO家族蛋白（尤其是重組人APOE），直接支持了LILRB4配體篩選、信號(hào)通路解析及功能驗(yàn)證，是揭示“APOE/LILRB4軸"在白血病免疫逃逸中作用的關(guān)鍵合作伙伴。

具體產(chǎn)品：

APOA1

APOA2

APOA4

APOB

APOC1

APOC2

APOC3

hAPOE

功能用途：

作為候選配體，通過蛋白液相色譜（FPLC）和表面等離子共振（SPR）篩選，驗(yàn)證其與 LILRB4 的結(jié)合能力。
用于體外實(shí)驗(yàn) 中模擬生理?xiàng)l件下APOE對(duì)LILRB4的激活作用，證明其通過特定結(jié)構(gòu)域（如Ig樣結(jié)構(gòu)域）與LILRB4相互作用。

關(guān)于ATHENS

Athens Research & Technology公司（ART），自1986年成立以來，已近40年專注于生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)天然蛋白質(zhì)，致力于為體外診斷（IVD）行業(yè)及研究人員提供高純度、高活性的產(chǎn)品。我們的制造流程嚴(yán)格，質(zhì)量承諾值得信賴，確?？蛻裟軌蛞蕾囄覀兊牡鞍踪|(zhì)開發(fā)可靠、準(zhǔn)確的診斷試劑，滿足當(dāng)今醫(yī)療保健的迫切需求。