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中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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關(guān)于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)邊緣效應(yīng)問(wèn)題的分析

時(shí)間:2017-8-3閱讀:1098
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關(guān)于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)邊緣效應(yīng)問(wèn)題的分析

我們?cè)谑褂肊LISA試劑盒96孔板的實(shí)驗(yàn)測(cè)定的時(shí)候,常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)",也就是外周孔顯色較 中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體,在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中,將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱,板也升溫時(shí),在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí),將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)",并且可提高測(cè)定的重復(fù)性。 
    還有就是在實(shí)驗(yàn)中,必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。提醒注意:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性,下次測(cè)定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。
    ELISA試劑盒使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買(mǎi)提取試劑盒,如果不是試劑盒,或許能提出RNA,但不能確保其質(zhì)量以及完整性。

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