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對肽樣品的質譜分析前使用SPE小柱脫鹽的操作方法
閱讀：7187 發(fā)布時間：2015-7-3對肽樣品的質譜分析前使用SPE小柱脫鹽的操作方法
SPE脫鹽操作對于LC-MS分析很重要，對于常規(guī)LC-UV分析不是必需操作。
試劑和設備：所有的試劑應在使用前新鮮配制。
當使用1 mL C18 SPE柱時 (貨號：218SPE1000)時，推薦的操作方法是：
- 用1.0 mL 乙腈預活化小柱。
- 用0.5 mL 0.1% TFA水溶液預平衡小柱。然后用0.5mL再重復一次。
- 將0.2 mL 含有0.1-0.2% TFA的肽樣上樣到SPE柱上，肽被SPE保留。
- 用0.5 mL 0.1% TFA水溶液清洗SPE小柱，除去弱保留的雜質。
- 用0.2 mL 75:25 (或甚至 90:10) 不含任何TFA的乙腈/水溶液將肽從SPE柱上洗脫下來。
- 使用氮氣流（或使用真空離心管，加熱不應超過30攝氏度）將洗脫收集物揮發(fā)至約10 μL。
- 加入190 μL 含有0.2% 甲酸和 0.01% TFA的 5:95 乙腈/水溶液。
- 渦旋混合后，樣品存放在冰箱中。此樣品即可用于LCMS進樣分析。
注意：要讓溶液流過SPE小柱，可在SPE柱管上方施加正壓。施加正壓的辦法可以是將一個1000μL 塑料吸液槍頭(pipet tip)加在氮氣管路上，然后將此吸液槍頭摁在SPE小柱的頂端開口端。