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使用 Skyline 創(chuàng)建單克隆抗體的 MRM 方法
在抗體藥物的血藥濃度定量分析中，使用配體結(jié)合的傳統(tǒng)方法進(jìn)行測定時(shí)，必須針對(duì)目標(biāo)藥物制備具有高度特異性和親和性的檢測抗體，并且確立分析方法也需要耗費(fèi)大量的時(shí)間和費(fèi)用。而使用 LC/MS/MS 進(jìn)行分析，由于不需要制備抗體，不僅大幅度縮短了分析方法的創(chuàng)建時(shí)間，還可以降低成本。
本文向您介紹使用Skyline 軟件和島津LCMS-8050/8060 創(chuàng)建MRM方法，對(duì)生物樣品中的單克隆抗體進(jìn)行特異性檢測的分析示例。 免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)是由分子量約 23,000Da 的輕鏈和分子量 50,000～70,000Da 的重鏈構(gòu)成，不同物種之間氨基酸序列保持一致稱為保守區(qū)域，各抗體分子中不同氨基酸序列部分被稱為可變區(qū)。在可變區(qū)中，規(guī)定抗原識(shí)別特異性的區(qū)域被稱為互補(bǔ)決定區(qū)（CDRs）。該區(qū)域在抗體分子間的氨基酸序列存在多樣性。免疫球蛋白中，重鏈和輕鏈分別含有 3 處 CDRs，為了將血液樣品中的抗體藥物等單克隆抗體與內(nèi)源性抗體區(qū)分開定量，必須選擇性地檢測 CDRs。使用創(chuàng)建的分析方法測定經(jīng)胰酶酶解的單克隆抗體。測定后數(shù)據(jù)文件將直接導(dǎo)入到 Skyline，并自動(dòng)選擇高靈敏度的肽碎片和定量靈敏度高的離子對(duì)，由此篩選*定量分析條件。因此，島津LCMS-8050/8060 和 Skyline 軟件的組合使用，縮短定量分析方法的創(chuàng)建時(shí)間。
免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)和互補(bǔ)性決定區(qū)（CDRs）
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