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導 讀

近年來，以核酸藥物為首的功能性核酸備受關注，2021年底治療罕見病脊髓性肌肉萎縮的反義寡核苷酸藥物諾西那生鈉進入中國醫(yī)保，幾乎同一時間，諾華降血脂的小干擾RNA藥物Leqvio獲FDA批準上市，據(jù)悉一年只需用藥兩次。寡核苷酸藥物已經(jīng)從罕見病過渡到了常見慢性病，并可大大降低患者用藥頻率。

隨著寡核苷酸類藥物的陸續(xù)上市，核酸藥物已成為當前生命科學和藥物研究的熱點之一。為了更好促進核酸藥物的快速發(fā)展，上海首個核酸產(chǎn)業(yè)園于7月中旬在上海杭州灣經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)正式開工，該產(chǎn)業(yè)園是以生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)為發(fā)展方向，基于核酸開發(fā)各種疫苗及藥物。今天，我們就一起來聊聊核酸藥物以及解鏈溫度等話題。

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核酸藥物小科普

核酸類藥物

核酸類藥物是各種具有不同功能的寡聚核糖核苷酸(RNA)或寡聚脫氧核糖核苷酸(DNA)，能夠直接作用于致病靶基因或者靶mRNA，在基因水平上發(fā)揮治療疾病的作用。常見的寡核苷酸藥物主要包括反義寡核苷酸（ASO）、小干擾RNA（siRNA）、微小RNA（microRNA）、小激活RNA（saRNA）、適配體（Aptamaer）、信使RNA（mRNA）。

解鏈溫度

在這些核酸藥物中，對于具有雙鏈結構的藥物，需要對其解鏈溫度進行分析。解鏈溫度是衡量雙鏈結構核酸類物質熱穩(wěn)定性的重要指標，它是控制結構和功能的關鍵因素。例如小干擾RNA（siRNA）藥物等具有雙鏈結構，當溫度升高時，氫鍵斷裂，雙鏈逐漸解體，形成單鏈結構。這種現(xiàn)象稱為核酸的“溶解"，將雙鏈和單鏈所占比例相等的溫度定義為解鏈溫度(Tm）。

因為核酸類物質在260 nm附近有一個紫外吸收峰，吸收值在解鏈過程中增加，通過測試該吸光度變化，以確定Tm值。因此在進行核酸藥物Tm值分析時，可以利用紫外分光光度計加上控溫附件和對應的數(shù)據(jù)分析軟件來完成。

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分析利器

對于核酸解鏈溫度Tm測試，島津擁有成熟的方法和分析設備，該設備一般為UV-1900i配Tm分析系統(tǒng)(TMSPC-8)。Tm分析系統(tǒng)由8列控溫支架、專用8列微量比色池、溫度控制器和Tm分析軟件構成，最多可同時測定8個樣品。

UV-1900i和Tm分析系統(tǒng)

專用8列微量比色池（光程10 mm）

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案例分享

接著小編帶您看看具體的寡核苷酸分析案例，操作步驟簡單快捷，結果直觀。

測試樣品為M13-25mer核酸，測試前先進行樣品溶液脫氣的預處理，通過UV-1900i和Tm分析系統(tǒng)可以輕松獲得Tm 曲線（繪制260nm處的吸光度對溫度曲線，如下圖所示），該曲線可以顯示升溫時和降溫時的結果。

樣品的Tm曲線

測試完成后，可以通過中線法和微分法兩種方法計算Tm值，最終得到的Tm值結果基本一致。

Tm計算結果

結 語

核酸分子的解鏈溫度對核酸藥物的穩(wěn)定性、有效性等研究有重大意義，在核酸藥物研發(fā)生產(chǎn)過程是一個重要的參數(shù)指標。島津紫外配合Tm分析系統(tǒng)，可以滿足輕松獲取Tm曲線，通過中線法或者微分法均可計算Tm溫度，滿足測試要求，為核酸藥物質量控制提供了可靠數(shù)據(jù)。

更多寡核苷酸藥物分析，敬請持續(xù)關注。

撰稿人：王娟娟

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