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高通量微升級液滴培養(yǎng)組學系統(tǒng)的核心操作

閱讀:184      發(fā)布時間:2025-7-31
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高通量微升級液滴培養(yǎng)組學系統(tǒng)是基于液演微流控技術開發(fā)的微型化高通量單細胞培養(yǎng)及分選裝備,可以實現對環(huán)境菌群在單細胞水平上進行分離培養(yǎng),并分選保存至多孔板中,形成雙重備份。單次運行實現可以處理約5000個液滴(500個單克隆),液滴生成后存儲于高透氣性管路中進行孵育(0-3天),最后通過光學信號(OD、熒光、化學發(fā)光等)進行檢測分選,分選后的液滴進入多孔板中并且可以形成雙重備份。
核心操作流程:
步驟1:液滴生成
將樣品與培養(yǎng)液分別注入芯片進樣口,啟動液滴生成模塊;
控制液滴體積為1-4μL‌,通量5000-10000個/小時‌,顯微鏡初步確認單細胞包裹率‌。
步驟2:液滴培養(yǎng)
液滴轉移至高透氣性聚合物管路(如氟化乙烯丙烯共聚物管路);
設置培養(yǎng)參數:
溫度:根據微生物需求(通常25-37℃);
時間:‌0-60天‌(常規(guī)培養(yǎng)3-8天)‌;
氧分壓:需厭氧環(huán)境時啟用控氧模塊(維持氧氣≤0.04%)‌。
步驟3:實時光學檢測
開啟多波段光學檢測(OD600/熒光/化學發(fā)光),以‌1800-2500個/小時‌速率掃描液滴;
設定閾值:如OD>0.2判定為生長陽性液滴‌。
步驟4:目標液滴分選
激活分選模塊,將目標液滴(如高熒光信號)精準噴射至96/384孔板;
分選通量‌1800-2500個/小時‌,自動記錄位置并生成雙重備份‌。
步驟5:液滴回收與驗證
分選后孔板移出,穿刺液滴釋放細胞;
涂布平板或PCR驗證單克隆純度‌。
 

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