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青海發(fā)光桿菌組織培養(yǎng)再生

閱讀:740      發(fā)布時間:2017-11-3
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步驟一:青海發(fā)光桿菌接種
組織培養(yǎng)的接種是指將滅過菌的材料,在無菌的情況下,切成小塊,放入培養(yǎng)基的過程??蒲小⒉块T的接種工作,多在無菌室或超凈工作臺上進(jìn)行,中學(xué)可制作接種箱,在箱內(nèi)進(jìn)行接種。接種的方法步驟如下:
①在無菌室或接種箱中放好接種時所需要的酒精燈、貯存70%酒精和棉球的廣口瓶、各種鑷子、接種針、解剖刀、手術(shù)剪、火柴、培養(yǎng)基等。
②在無菌室或接種箱內(nèi)用紫外燈滅菌(無菌室照射20~50分鐘,接種箱照射15分鐘)。
③放入已滅菌的接種材料(用培養(yǎng)皿盛?。M瑫r,操作人員用酒精棉球擦手,并對接種工具用酒精燈火焰燒灼。
④用手術(shù)刀片將材料切割成若干片段,并迅速接種入培養(yǎng)基中。接種時,錐形瓶(或試管)應(yīng)斜向火焰,在酒精燈火焰附近操作。
⑤材料接種好后,將錐形瓶瓶口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動燒一遍,蓋好瓶蓋,注明材料名稱及接種日期。
材料接種后,應(yīng)置于26~28℃的培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)。
步驟二:青海發(fā)光桿菌植株誘導(dǎo)
本階段是組織培養(yǎng)中zui重要的一環(huán)。在培養(yǎng)基中植物激素的作用下,外植體通過三條途徑迅速增殖,這就是側(cè)芽增殖、誘導(dǎo)不定芽的形成和誘導(dǎo)胚狀體的形成。
*    RT    5克    乙酸鈰
*    RT,避光    1克    2-氨基聯(lián)苯
*        5克    硼氫化鈉
*    RT    5克    異丙胺
*    RT    1克    脫脂奶粉
*    2~8℃,避光    1克    肝浸粉(牛)
*    RT,避光    25克    瓊脂粉
*    RT,避光    100克    小牛浸膏粉
*    RT,避光    5克    三號膽鹽
*    RT    100克    豬膽鹽
*    RT,避光    100克    酶水解干酪素
*        100克    小牛血清
青海發(fā)光桿菌

 

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