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制備單克隆抗體時有哪些具體步驟

閱讀：1302 發(fā)布時間：2023-12-19

一抗可用于檢測糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病的生物標志物。二抗則主要用于檢測和純化抗原蛋白。二抗在標記和檢測方面比較靈敏和靈活。所以，它們在流式細胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡和細胞成像等一系列應(yīng)用中用于一抗的比色、化學(xué)發(fā)光和熒光檢測。二抗類型的選擇基于一抗的類別：免疫球蛋白IgG或IgM、標簽類型和來源宿主。

制備單克隆抗體時有哪些具體步驟：

一、免疫動物選擇

根據(jù)需要產(chǎn)生目標抗原的免疫反應(yīng)，選擇合適的免疫動物。例如，小鼠是免疫動物之一，因其易于操作且在免疫應(yīng)答方面較為強大。

二、抗原免疫

將目標抗原注射到免疫動物體內(nèi)，通常需要多次免疫以激發(fā)免疫反應(yīng)。可以選擇不同的免疫路線，如皮下、腹腔、靜脈等。

三、細胞融合

從免疫動物獲得脾細胞或淋巴細胞，與骨髓瘤細胞或其他癌細胞（如SP2/0、NS0等）融合，形成雜交瘤細胞。融合細胞通常使用（PEG）或電穿孔等方法促進細胞融合。

四、雜交瘤細胞篩選

對融合細胞進行篩選，一般使用HAT選擇性培養(yǎng)基，通過對非雜交瘤細胞和單克隆雜交瘤細胞的抗代選擇，篩選出產(chǎn)生目標抗體的單克隆雜交瘤細胞。

五、單克隆抗體生產(chǎn)

從篩選出的單克隆雜交瘤細胞中獲取單一細胞系，并進行大規(guī)模培養(yǎng)和產(chǎn)生抗體。一般可采用體外或體內(nèi)方式。

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