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耐藥細胞構建的原理和實驗要點說明

閱讀:2071      發(fā)布時間:2021-4-18
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   耐藥細胞構建的原理:
  細胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細胞本身藥物化學過程的改變,細胞膜上出現(xiàn)Pgp糖蛋白,使細胞逐漸對藥物耐受,隨著藥物濃度的遞增,其耐受程度逐漸加強。
 
  耐藥細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
  1.研究的對象是活細胞
  在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
 
  2.研究條件可以人為控制
  pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,產(chǎn)品僅供科研可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
 
  3.研究的樣本可以達到比較均一性
  通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
 
  4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
  采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
 
  耐藥細胞的實驗要點說明:
  1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
 
  2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
 
  3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
 
  4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
 
  5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

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