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PCR檢測試劑盒DNA復制用三個步驟的實現(xiàn)方法

閱讀:2569      發(fā)布時間:2021-3-20
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   PCR檢測試劑盒的實驗室檢查:
  一般檢查
  血常規(guī):部分病例可有白細胞和血小板減少。
 
  血清學檢查
  1.寨卡病毒IgM檢測:采用酶聯(lián)免疫吸附法、免疫熒光法等進行檢測。
  2.寨卡病毒中和抗體檢測:采用空斑減少中和試驗檢測血液中和抗體。應盡量采集急性期和恢復期雙份血清開展檢測。
  寨卡病毒抗體與同為黃病毒屬的登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒抗體等有較強的交叉反應,易于產(chǎn)生假陽性,在診斷時應注意鑒別。
 
  病原學檢查
  1.病毒核酸檢測:采用熒光定量RT-PCR檢測寨卡病毒。
  2.病毒抗原檢測:采用免疫組化法檢測寨卡病毒抗原。
  3.病毒分離培養(yǎng):可將標本接種于蚊源細胞或哺乳動物細胞等方法進行分離培養(yǎng),也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進行病毒分離。
 
  PCR檢測試劑盒DNA復制用三個步驟的實現(xiàn)方法是:
  1、變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,為下輪反應作準備;
  2、退火:退火也叫復性,模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,在這個溫度下,模板DNA單鏈能夠與引物的互補序列配對結合;所謂引物,是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段,通過引物找到模板DNA的相應位置,也就是確定了復制的起點;
  3、延伸:DNA模板-引物結合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP(脫氧核糖核苷三磷酸,可構成DNA)為反應原料,靶序列為模板,按照堿基互補配對原則和半保留復制原理,就能合成一條新的與模板DNA鏈互補的復制鏈。

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