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費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌沙土保藏法操作步驟

閱讀:1495      發(fā)布時(shí)間:2017-6-22
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費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌沙土保藏法操作步驟:

(1)取河沙加入10%稀鹽酸,加熱煮沸30分鐘,以去除其中的有機(jī)質(zhì)。

(2)倒去酸水,用自來(lái)水沖洗至中性。

(3)烘干,用40目篩子過(guò)篩,以去掉粗顆粒,備用。

(4)另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土,加自來(lái)水浸泡洗滌數(shù)次,直至中性。

(5)烘干,碾碎,通過(guò)100目篩子過(guò)篩,以去除粗顆粒。

(6)按一份黃土、三份沙的比例(或根據(jù)需要而用其他比例,甚至可全部用沙或全部用土)摻合均勻,裝入10×100mm的小試管或安瓿管中,每管裝1g左右,塞上棉塞,進(jìn)行滅菌,烘干。

(7)抽樣進(jìn)行無(wú)菌檢查,每10支沙土管抽一支,將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)48小時(shí),若仍有雜菌,則需全部重新滅菌,再作無(wú)菌試驗(yàn),直至證明無(wú)菌,方可備用。

(8)選擇培養(yǎng)成熟的(一般指孢子層生長(zhǎng)豐滿(mǎn)的,營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞用此法效果不好)優(yōu)良費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種,以無(wú)菌水洗下,制成孢子懸液。

(9)于每支沙土管中加入約0.5ml(一般以剛剛使沙土潤(rùn)濕為宜)孢子懸液,以接種針拌勻。

(10)放入真空干燥器內(nèi),用真空泵抽干水分,抽干時(shí)間越短越好,務(wù)使在12小時(shí)內(nèi)抽干。

(11)每10支抽取一支,用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒,接種于斜面培養(yǎng)基上,進(jìn)行培養(yǎng),觀(guān)察生長(zhǎng)情況和有無(wú)雜菌生長(zhǎng),如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長(zhǎng),則說(shuō)明制作的沙土管有問(wèn)題,尚須進(jìn)一步抽樣檢查。

(12)若經(jīng)檢查沒(méi)有問(wèn)題,用火焰熔封管口,放冰箱或室內(nèi)干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。

(13)需要使用費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種,復(fù)活培養(yǎng)時(shí),取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內(nèi),置溫箱中培養(yǎng)。

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