實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（培養(yǎng)基和試劑）
平板計(jì)數(shù)瓊脂、75%乙醇、磷酸鹽緩沖稀釋液
操作步驟
1.樣品制備
1）以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。如有包裝，則用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。
2）制備樣品勻液：以無菌操作取25g樣品，放入裝有225ml稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min均質(zhì)1-2min，制成1:10的樣品勻液。如樣品均質(zhì)時(shí)間超過2min，應(yīng)在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。
3）稀釋樣品勻液：用10ml滅菌吸管準(zhǔn)確吸取1:10的樣品勻液10ml，放入裝有90ml稀釋劑的150ml 稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1:100的樣品勻液。振搖時(shí)，幅度為30cm，7s內(nèi)振搖25次。從容器中吸取樣品勻液和以后的稀釋操作中，吸管尖不要碰著瓶口。吸入的液體應(yīng)先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其離開液面并貼在容器內(nèi)壁將液體調(diào)至所要求的刻度。
2.平板接種
1）對(duì)于每個(gè)樣品，選用合適的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品液進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。
2）分別用滅菌吸管吸取1ml樣品液放入作了適宜標(biāo)志的平皿內(nèi)。每個(gè)稀釋度的樣品液用兩個(gè)平皿。
3）分別加12-15ml平板計(jì)數(shù)瓊脂（約45℃左右）到平皿內(nèi)。立即將平皿內(nèi)的樣品液和瓊脂培養(yǎng)基充分混合。要防止把混合物濺到平皿壁和蓋上。同時(shí)將平板計(jì)數(shù)瓊脂傾入加有1ml稀釋劑的另一滅菌平皿作空白對(duì)照。將樣品液加入平皿后應(yīng)立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每個(gè)樣品從開始稀釋到傾注zui后一個(gè)平皿所用的時(shí)間不得超過20min。
3.培養(yǎng)
待瓊脂凝固后將平皿翻轉(zhuǎn)，立即放進(jìn)36±1℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48±2h。培養(yǎng)箱應(yīng)保持一定的濕度，經(jīng)48h培養(yǎng)的瓊脂培養(yǎng)基的失重不得超過15%。
4.菌落計(jì)數(shù)和記錄
1）培養(yǎng)后，立即計(jì)數(shù)每個(gè)平板上的菌落數(shù)。25-250個(gè)菌落為合適范圍。如不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板存放于0-4℃，但不得超過24h。
2）操作者對(duì)同一平板復(fù)核自己的計(jì)數(shù)結(jié)果，其差異應(yīng)在5%之內(nèi)，而其他人對(duì)這一平板重復(fù)計(jì)數(shù)，其差異應(yīng)在10%這內(nèi)。否則，應(yīng)找出原因，加以校正。
5.計(jì)算
適宜稀釋度的兩個(gè)平板的菌落數(shù)平均值或兩個(gè)稀釋度的平板菌落數(shù)平均值乘以相應(yīng)稀釋度倍數(shù)計(jì)算出每克（毫升）樣品中平板菌落數(shù)。
記錄時(shí)，只有在換算到每克（毫升）樣品中平板菌落數(shù)時(shí)，才能定下兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)字采用四舍五入的方法記錄。也可將樣品的平板菌落數(shù)記錄為10的指數(shù)形式。
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