彎曲桿菌(Campylobacter spp.)是一種重要的食源性病原菌。彎曲桿菌屬(Campylobacter genus)包括6個(gè)種及若干亞種。其中空腸彎曲桿菌(C. jejuni)、結(jié)腸彎曲桿菌(C. coli)和胎兒彎曲桿菌(C. fetus)占所有從人體分離的99%(空腸彎曲桿菌占90%)??漳c彎曲桿菌為革蘭氏陰性微需氧細(xì)菌。其培養(yǎng)條件苛刻,在空氣中不能生長(zhǎng),在普通培養(yǎng)基上也難以培養(yǎng)。在微需氧條件下(85 % N2, 5% O2 和10% CO2)在凝固血清和血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)48小時(shí)可見(jiàn)無(wú)色半透明的小菌落,zui適生長(zhǎng)溫度為42°C,在37°C下也能培養(yǎng),但生長(zhǎng)速度較慢。彎曲桿菌增菌用布氏肉湯液體培養(yǎng)基。常用的生長(zhǎng)培養(yǎng)基為Skirrow固體培養(yǎng)基和Camp-BAP固體培養(yǎng)基。彎曲桿菌耐藥實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基為MH固體培養(yǎng)基。為了保證彎曲桿菌的生長(zhǎng),通常需要在固體培養(yǎng)基中加入5%(v/v)的脫纖維裂解羊血。本實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)述彎曲桿菌所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、菌株分離注意事項(xiàng)和菌株保存方法。
(1)、由于彎曲桿菌是微需氧的細(xì)菌,生長(zhǎng)條件苛刻,存在分離率低、培養(yǎng)復(fù)雜且難以保存的問(wèn)題。從食品中分離彎曲桿菌首先要保證食品的新鮮度,此外還可通過(guò)布氏肉湯增菌步驟來(lái)提高分離率。
(2)、彎曲桿菌的生長(zhǎng)力較弱,容易受到大腸桿菌、沙門氏菌等雜菌的污染,因此微生物實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)保持無(wú)菌,為降低雜菌污染,也可在培養(yǎng)基中加入萬(wàn)古霉素和多粘菌素B。
(3)、彎曲桿菌培養(yǎng)用的血平板應(yīng)保持新鮮。脫纖維裂解羊血在4°C條件下可保存兩周,制備好的血平板在4°C條件下zui多保存一周。
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