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伯樂轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟
閱讀：3945 發(fā)布時間：2016-7-6
伯樂轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟：
全程請戴手套操作，以免污染伯樂轉(zhuǎn)印槽！
1）電泳后SDS-PAGE 膠片浸在轉(zhuǎn)印緩沖液中，洗2~3 次，每次10min.
2）取出伯樂轉(zhuǎn)印槽，先小心放一攪拌子在底部，再倒一半轉(zhuǎn)印緩沖液。
3）取轉(zhuǎn)印紙切成約如膠片大小，先在方形培養(yǎng)皿中以少許甲醇浸濕數(shù)秒鐘，再置入伯樂轉(zhuǎn)印槽中的緩沖液10 min 后使用。 另取兩張濾紙，以及兩片方形海綿墊，都放在伯樂轉(zhuǎn)印槽的緩沖液中備用。
4）取出轉(zhuǎn)印夾打開平放，先墊一張方形海棉墊，鋪上一張濕濾紙，小心平鋪SDS-PAGE膠上去，然后小心迭上已潤濕的轉(zhuǎn)印紙，用涂菌玻璃棒趕出氣泡；轉(zhuǎn)印紙再滴上數(shù)滴緩沖液后，加蓋一層濾紙，及另一張海綿，也都不可陷入氣泡，即可把整個轉(zhuǎn)印三明治卡夾裝好。
膠迭到轉(zhuǎn)印紙時，一次成功，不要重作，否則蛋白質(zhì)色帶可能會印上去，后產(chǎn)生重迭影像。
5）將轉(zhuǎn)印三明治置入已經(jīng)放有一半轉(zhuǎn)印緩沖液的伯樂轉(zhuǎn)印槽中，注意有轉(zhuǎn)印紙的那一面向正極（紅色），膠片那面向負極（黑色）。
6）當三明治都放入伯樂轉(zhuǎn)印槽后，以轉(zhuǎn)印緩沖液蓋滿所有的三明治，小心動一動卡夾，除去附在卡夾內(nèi)外的氣泡，蓋上蓋子，放到一攪拌器上，打開攪拌器開始攪拌，同時接好電源，裝置完成后放置10 min.
7）以300mA開始轉(zhuǎn)印，溫度會漸漸上升，轉(zhuǎn)印1.5 h左右 后中止轉(zhuǎn)印，取出轉(zhuǎn)印三明治，打開后依次取出轉(zhuǎn)印紙及膠。
具體轉(zhuǎn)印條件要根據(jù)蛋白的大小進行優(yōu)化，注意低溫。
8）轉(zhuǎn)印后的膠片可以繼續(xù)進行染色，看有無蛋白質(zhì)殘留。若電泳時加有藍色標準蛋白質(zhì)marker（SeeBlue），則可在轉(zhuǎn)印紙上看到藍色的色帶，確定轉(zhuǎn)印成功，并可評估轉(zhuǎn)印效率。