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技術(shù)文章

高效液相色譜出現(xiàn)雙峰的原因

閱讀:2152          發(fā)布時間:2023-6-9

明明實(shí)驗(yàn)時只分析一種物質(zhì),為什么峰圖會出現(xiàn)雙峰呢?通常情況下,正確的峰型應(yīng)該是尖銳而對稱的,出現(xiàn)雙峰應(yīng)該是實(shí)驗(yàn)過程中有錯誤的步驟導(dǎo)致的。液相色譜出現(xiàn)“雙峰"的原因有很多。一般有以下幾種原因:色譜柱、溶劑、進(jìn)樣量、樣品特性和pH值。恒譜生簡單介紹其中色譜柱、溶劑因素導(dǎo)致出現(xiàn)雙峰及解決辦法。

賽默飛色譜柱使用注意事項(xiàng)(1)

色譜柱:

如何判斷是色譜柱出現(xiàn)問題導(dǎo)致雙峰出現(xiàn)呢?操作人員分析單一純物時,如果每個色譜峰都出現(xiàn)雙峰,可以確定是色譜柱頭受損或者是柱頭污染了。如果是色譜柱正常,進(jìn)樣量少并且色譜峰形為一大峰帶一小峰,不一定拖尾,這種情況可能是柱頭受堵??梢詫⑸V柱反過來接,用流動相或其它溶劑沖洗掉堵在柱頭的殘留物,然后再反過來,一般都能解決。如果反復(fù)還是不能解決問題,可能是柱頭塌陷的問題。液相色譜柱壽命在正確使用時可達(dá)2年以上,但是柱子使用一段時間后,可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂造成柱頭塌陷,這時可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。每次使用完色譜柱后,需用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,以延長色譜分析柱的壽命。

色譜柱頭塌陷的原因有很多,比較常見的是色譜泵壓力過高,填料壓碎產(chǎn)生空隙。除此之外還有諸如裝填時壓力過低,不密實(shí);流動相溶解填料,造成空隙;色譜柱入口篩板堵塞等原因。色譜篩板能有效地?cái)r截樣品、流動相或管線及密封件的顆粒物對色譜柱的污染,保護(hù)色譜柱和儀器。篩板使用一段時間后,攔截的污染物會堵塞篩板,因此需要定期更換。但是相較于損壞色譜柱,更換一個篩板顯得性價(jià)比更高,成本更低廉。

溶劑問題:

反相色譜流動相多為甲醇、乙腈、水,實(shí)驗(yàn)中往往會從中加各種添加劑以改善分離性能。有時候?yàn)榱藰悠返娜芙庑曰蚍€(wěn)定性加入了一點(diǎn)的緩沖液,但是緩沖液的酸堿性可能會導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化,從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象??梢愿鼡Q緩沖液或者更換流動相試一試。

影響雙峰出現(xiàn)的原因還有很多,比如樣品超過柱載量,從而導(dǎo)致二次分配;儀器間隔記錄時間太短都有可能造成雙峰出現(xiàn),因此具體情況要具體分析。


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