 | 重慶市華雅干細胞技術有限公司 |
13
15021010459
當前位置：首頁>>技術中心>>技術文章>>【買試劑，找華雅】mRNA轉染IVT攻略：流程及試劑推薦
在線溝通：
顏先生 （經理）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機：
- 15021010459
- 傳真：
- 023-63419626
- 聯(lián)系我時，
- 告知來自化工儀器網
- 個性化：
- www.hystemcell.cn
- 公司網站：
- https://www.ys-bio.cn/
【買試劑，找華雅】mRNA轉染IVT攻略：流程及試劑推薦
閱讀：603發(fā)布時間：2025-1-15
mRNA轉染的優(yōu)勢
與DNA相比，mRNA轉染具有以下優(yōu)勢：
- 高效且可控的表達：mRNA能迅速翻譯為蛋白質，表達短暫且可控，降低過度表達風險。
- 細胞友好：mRNA引入細胞內不易造成損傷。
- 安全性與低免疫原性：mRNA不整合入宿主基因組，降低基因突變風險，降解產物為細胞自然成分。
- 快速響應與靈活性：mRNA快速合成能力使科學家能迅速調整實驗方案。
IVT的主要步驟
模板制備
- 以質粒DNA為起點，通過瓊脂糖電泳鑒定質粒。
- 選擇超螺旋狀態(tài)最佳的菌株，進行線性化質粒，選擇合適的限制性內切酶（如BsaI）進行切割。
酶法加帽
- IVT后，使用牛痘病毒加帽酶和mRNA 2'-O-甲基轉移酶為mRNA加帽，增強穩(wěn)定性。
轉錄反應
- 準備線性化質粒模板，加入轉錄緩沖液、NTPs和RNA聚合酶，在37°C孵育合成大量mRNA。
純化
- 采用柱純化、磁珠純化或酚/氯仿純化等方法，去除雜質，提取純凈的mRNA。
定量與檢測
- 使用紫外吸收法、染料法或毛細管電泳法對mRNA進行定量和純度檢測。
共轉錄法加帽
- 為提高效率，可在IVT過程中直接加入帽子類似物，實現(xiàn)轉錄與加帽同步進行。
IVT的主要試劑
目前市場上有多種成熟的商品化IVT試劑盒，如Thermo Fisher、NEB、諾唯贊、江蘇申基等，均提供完善的解決方案。
轉染試劑選擇
ProteanFect
- 首·款基于蛋白遞送的轉染試劑，非常適合mRNA轉染。
- 在多種難轉染細胞系中效率顯著優(yōu)于lipofectamine。
ProteanFect在難轉細胞中的應用
- 在Jurkat T細胞中，ProteanFect展現(xiàn)出對多種類型核酸的高效遞送能力。
重慶市華雅干細胞技術有限公司主營產品：Lonza支原體檢測試劑盒,Stemcell胚胎干細胞培養(yǎng)基,StemRD生長分化因子
化工儀器網 設計制作，未經允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.9av99.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責，化工儀器網對此不承擔任何保證責任。 溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。