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中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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質(zhì)譜技術(shù)鑒定蛋白功能

時(shí)間:2014-7-23閱讀:1985
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蛋白組學(xué)的另一個(gè)重要任務(wù)是鑒定在一個(gè)基因序列里被編碼的蛋白的功能和作用。蛋白組技術(shù)使人們能夠通過一些新的策略,而快速獲取這些信息。這些策略包括:基于“牽連犯罪” 概念的方法;根據(jù)活性將蛋白富集再鑒定;全細(xì)胞或細(xì)胞器分析等。

定性蛋白組學(xué)的zui終目的是完成對(duì)所有存在蛋白的全覆蓋。要達(dá)到這個(gè)目的,所有的蛋白需要被適當(dāng)?shù)叵獠⒖扇?。使用多蛋白酶消解可以提高序列覆蓋度。此外,像電子轉(zhuǎn)移解離(ETD)這樣的新方法可以使人們有效地碎片化更大尺寸的肽段。高的序列覆蓋度有益于分辨蛋白的亞型。對(duì)于復(fù)雜的混合物,例如細(xì)胞或組織裂解液,離子抑制和動(dòng)態(tài)范圍是兩個(gè)挑戰(zhàn)。如果能夠很好地降低或消除離子抑制,那么就可以更加均一地實(shí)現(xiàn)肽的離子化,從而改善定性和定量分析。動(dòng)態(tài)范圍方面的挑戰(zhàn)除了與離子抑制有關(guān)外,主要是和質(zhì)譜儀器的檢出限有關(guān)。除了離子抑制和動(dòng)態(tài)范圍外,第三個(gè)問題是質(zhì)譜的峰容量。針對(duì)這個(gè)問題,可采用的一個(gè)變通的策略就是所謂的“數(shù)據(jù)獨(dú)立采集(DIA)”,它已成為一個(gè)商品化技術(shù)。隨著質(zhì)譜儀器掃描速度變得越來越快,采用DIA技術(shù)進(jìn)行鑒別也就變得越發(fā)可行。我們可以看到,每一代串聯(lián)質(zhì)譜較之其上一代都會(huì)有顯著的改進(jìn),這推動(dòng)著蛋白組學(xué)向獲得一個(gè)完整蛋白組發(fā)展。不過,如何判定何時(shí)算是我們獲得了一個(gè)完整蛋白組依然是很困難的。此外,獲得一個(gè)完整蛋白組的關(guān)鍵是要有一個(gè)合理的實(shí)驗(yàn)策略,而非采用一個(gè)耗時(shí)的“蠻力搜索”策略。

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