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酶標(biāo)儀性能評價(jià)

閱讀:2926      發(fā)布時(shí)間:2017-7-28
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1.濾光片波長精度檢查及其峰值測定:用高精度紫外可見分光光度計(jì)(波長精度±

0.3nm)對不同波長的濾光片進(jìn)行光譜掃描,檢測值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長精度,其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好。

2.靈敏度和準(zhǔn)確度:(1)靈敏度:加200µl  6µg/ml重鉻酸鉀溶液于小孔中,以0.05mo1

L硫酸溶液作空白,于450nm(參比波長650nm)測定,其吸光度應(yīng)≥0.012)準(zhǔn)確度:準(zhǔn)確配制1mmol/L對硝基苯酚水溶液,以10mmo1L氫氧化鈉溶液25倍稀釋后加入200µl

于小孔杯中作空白,于405nm(參比波長650nm)檢測,其吸光度應(yīng)在0.4左右。

3.通道差與孔間差檢測:(1)通道差檢測:取一只酶標(biāo)微孔杯以酶標(biāo)板架作載體,將其內(nèi)含200 μl甲基橙溶液,吸光度0.5左右先后置于八個(gè)通道的相應(yīng)位置,蒸餾水調(diào)零,采用雙波長(測定波長490nm,參比波長630nm650nm)連續(xù)測三次,觀察其不同通道之間測量結(jié)果的一致性(2)孔間差的測量:選擇同一廠家、同一批號酶標(biāo)板條(8條共96孔)分別加入200µl甲基橙溶液(吸光度調(diào)至0.0650.070)先后置于同一通道,蒸餾水調(diào)零,采用雙波長檢測,其誤差大小用±1.96s衡量。

4.零點(diǎn)飄移:取8只小孔杯,分別置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置,均加入200µl蒸餾水并調(diào)零,采用雙波長或單波長(490nm)每隔30min測定一次,觀察8個(gè)通道4h內(nèi)的吸光度變化,其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。

5.精密度評價(jià):每個(gè)通道3只小杯,分別加入200µl高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液,蒸餾水調(diào)零,采用雙波長作雙份平行測定,每日測定兩次,連續(xù)測定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。

6.線性測定:準(zhǔn)確稱取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液,采用雙波長平行檢測8次,求其均值。計(jì)算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差Sy,x,并用±1.96Sy,x表示樣品的95%測量范圍。

7.雙波長評價(jià):取同一廠家、同一批號酶標(biāo)板條(每個(gè)通道2條共24孔)每孔加入200µl

甲基橙溶液(吸光度調(diào)至0.0650.070 )先后于8個(gè)通道分別采用單波長(490 nm)和雙波長(測定波長490nm、參比波長630 nm650nm)進(jìn)行檢測,計(jì)算單波長和雙波長測定結(jié)果的均值、離散度,比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長清除干擾因素的效果。

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