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明膠酶譜試劑盒操作注意事項

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明膠酶譜試劑盒操作注意事項!

1.制備聚丙烯酰胺時應(yīng)注意排除氣泡。

2.明膠酶譜的活性受鈣離子,鋅離子,和PH值等因素的影響,因此緩沖液配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確,盡量用超純水,孵育溫度也掌握好。

3.用大梳子

4.孵育液的PH在7.5-7.6,復(fù)性的TRITON時間長了會有絮狀物,所以實驗時盡量使用新鮮配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中,因為會改變孵育液的PH值,在普通孵箱即可。

6.細(xì)胞樣本用PBS 5倍體積震蕩裂解,估算細(xì)胞的體積,然后加入5倍體積的PBS,渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心.或者手動震蕩。

7.組織或者細(xì)胞的話可以用PBS,也可以用低滲溶液如三分之一或者四分之一的生理鹽水按照5倍體積加入后震蕩裂解細(xì)胞,離心即可,步驟和提蛋白很相似即可,其實重點的步驟主要是采用低滲裂解液進(jìn)行裂解,組織的話可以勻漿20-30次,然后10000轉(zhuǎn)左右離心,5分鐘取上清即可。

 

 

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