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在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)正以蓬勃之勢快速發(fā)展，成為眾多科研項(xiàng)目及生物制藥研發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)支撐。在體外轉(zhuǎn)錄的復(fù)雜體系中，RNA聚合酶堪稱核心“主角"，其以DNA為模板催化合成互補(bǔ)RNA分子的功能至關(guān)重要。T7、T3與SP6 RNA聚合酶均為常用工具酶，其中T7 RNA聚合酶因具備高效的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)能優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于各類體外轉(zhuǎn)錄場景。而SP6 RNA聚合酶由于高度SP6啟動子序列識別特異性，在精準(zhǔn)轉(zhuǎn)錄方面展現(xiàn)出優(yōu)勢，其與T7 RNA聚合酶形成功能互補(bǔ)，共同為不同科研需求提供差異化解決方案。
圖1. SP6 RNA Polymerase體外轉(zhuǎn)錄流程圖[1]
SP6 RNA聚合酶是一種DNA依賴型的5'→3' RNA聚合酶，它能夠高度特異性地識別SP6啟動子序列，僅以SP6啟動子下游的DNA為模板，高效催化單鏈或雙鏈DNA SP6啟動子下游NTP（核苷酸三磷酸）的摻入，從而合成與模板DNA互補(bǔ)的RNA鏈。不僅如此，它還能兼容如生物素標(biāo)記、熒光素標(biāo)記等修飾的NTP，為多樣化標(biāo)記RNA的合成提供了可能。憑借自身的特性，SP6 RNA聚合酶在科研與生物技術(shù)領(lǐng)域大顯身手，廣泛應(yīng)用于以下場景：
制備放射性標(biāo)記的RNA探針
體外轉(zhuǎn)錄制備mRNA疫苗
制備基因編輯向?qū)NA
制備siRNA、miRNA等小RNA
合成RNA反義鏈，用于調(diào)控基因表達(dá)研究
用于結(jié)構(gòu)、加工和催化性能研究的RNA
翌圣生物全新推出的SP6 RNA聚合酶，具有高效轉(zhuǎn)錄活性，且該產(chǎn)品經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，無內(nèi)切或外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果不受干擾。
性能展示
翌圣SP6 RNA Polymerase (Cat#14810)
高效轉(zhuǎn)錄：體外轉(zhuǎn)錄效果媲美進(jìn)口品牌
圖2. 翌圣SP6 RNA Polymerase與進(jìn)口品牌同類產(chǎn)品SP6 RNA Polymerase以帶有SP6 Promoter的線性化質(zhì)粒DNA為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄時(shí)的效果圖
注：分別添加不同酶活SP6 RNA Polymerase與0.1 μg帶有SP6 Promoter的線性化質(zhì)粒DNA為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，37℃孵育2h，70℃孵育10min終止反應(yīng)，加入2U DNase I (10325ES)，37℃孵育15min消化模板DNA，得到的RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為248 nt。取出10 μL反應(yīng)產(chǎn)物，加入5μL 2 × RNA Loading Buffer，70℃變性10min，然后進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，用1X TAE作為電泳液，160V電泳20min，染色后拍照觀察結(jié)果。
無核酸外切酶、切口酶、非特異性核酸酶、RNase酶殘留
圖3. 翌圣SP6 RNA Polymerase核酸外切酶、切口酶、非特異性核酸酶、RNase殘留檢測結(jié)果
注：將SP6 RNA Polymerase分別與核酸底物孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翌圣的3個批次SP6 RNA Polymerase均未檢測出核酸外切酶（100 U）、切口酶（100 U）、非特異性核酸酶（100 U）或RNase（20U）殘留，為您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性與可靠性保駕護(hù)航。
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產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 目錄價(jià) | 活動價(jià) |
SP6 RNA Polymerase (20 U/μL) | 14810ES84 | 2000 U | 439元 | 0元 |
活動細(xì)則：
1、活動時(shí)間：即日起-7月30日；
2、活動名額有限，每位客戶限一套。
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產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號 |
SP6 RNA聚合酶 | SP6 RNA Polymerase | 14810ES |
T7 RNA聚合酶 | T7 RNA Polymerase GMP-grade (250 U/μL) | 10625ES |
CleaScrip™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA, 250 U/μL) | 10628ES |
參考文獻(xiàn)：
[1]Karikó K. Developing mRNA for therapy[J]. The Keio Journal of Medicine, 2022, 71(1): 31-31.
[2]Krieg P A, Melton D A. [25] In vitro RNA synthesis with SP6 RNA polymerase[M]//Methods in enzymology. Academic Press, 1987, 155: 397-415.
