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組織乙酰輔酶A羧化酶活性光度法定量 檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

閱讀:1767          發(fā)布時間:2015-8-25
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主要用途

 組織乙酰輔酶A羧化酶(ACETYL-COA CARBOXYLASE)活性光度法定量檢測試劑是一種旨在通過底物乙酰輔酶A和碳酸氫鹽受到乙酰輔酶A羧化酶的催化反應(yīng)后,進而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測定產(chǎn)生ADP過程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH)的氧化反應(yīng), 即采用光度法測定其氧化后峰值的變化,以分析組織裂解樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動物、人體)、部分或*純化酶樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的定量檢測,以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,高度敏感。

技術(shù)背景

乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase;ACC;EC6.4.1.2),又稱為乙酰輔酶A碳酸氫鹽連接酶(Acetyl CoA:bicarbonate ligase-ATP),是ATP依賴性含生物素酶,參與脂肪酸生物合成。哺乳動物乙酰輔酶A羧化酶單體分子量為225-250Kd,含有許多磷酸化位點,以及1個生物素輔基位點、2個催化位點和1個異構(gòu)(allosteric)位點。乙酰輔酶A羧化酶催化生物素輔基(prosthetic group)的羧基化反應(yīng),然后將生物素上的羧基轉(zhuǎn)移到輔酶A上,產(chǎn)生丙二酰輔酶A(malonyl CoA),成為長鏈脂肪酸合成前的關(guān)鍵步驟。AMP活化蛋白激酶(AMP-Activated Kinase;AMPK)調(diào)節(jié)該酶的活性,而十四烷基氧糠酸(5-(tetradecyloxy)-2-furoic acid;TOFA)抑制該酶的活性。基于底物乙酰輔酶A(acetyl CoA)和碳酸氫鹽,在ATP的存在下,受到乙酰輔酶A羧化酶的催化,獲得產(chǎn)物丙二酰輔酶A和ADP,進而通過丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸oxidized nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其吸光峰值的變化340nm,來定量分析乙酰輔酶A羧化酶的活性。其反應(yīng)方式為:

Acetyl CoA Carboxylase

Acetyl Co-A  +  ATP  +  HCO3    Malonyl CoA  +  ADP  +  Pi


pyruvate kinase

Phosphoenolpyruvate   ADP             pyruvate   ATP

         

lactate dehydrogenase

pyruvate  +  NADH             lactate   NAD+

           (高吸收峰) (低吸收峰) 

產(chǎn)品內(nèi)容

 清理液(Reagent A)         60毫升

 裂解液(Reagent B)         10毫升

 緩沖液(Reagent C)   20毫升

 酶促液(Reagent D)   2毫升

 反應(yīng)液(Reagent E)   2毫升

 底物液(Reagent F)         2毫升

 陰性液(Reagent G)   500微升

 產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存 清理液(Reagent A)4冰箱里;其余的保存在-20冰箱里,避免反復(fù)凍融;有效保證6

用戶自備

1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器

DOUNCE勻漿器:用于裂解組織

(微型)臺式離心機:用于樣品預(yù)處理

1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析操作的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于樣品光度分析

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