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技術(shù)文章

特殊石蠟切片總膽固醇菲律賓熒光直接染色試劑盒說(shuō)明書(shū)

閱讀:1293          發(fā)布時(shí)間:2023-3-8

特殊石蠟切片總膽固醇(酯酶法)菲律賓(FILIPIN)熒光直接染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

特殊石蠟切片總膽固醇(酯酶法)菲律賓(FILIPIN)熒光直接染色試劑是一種旨在通過(guò)特殊脫蠟處理,進(jìn)

而使用膽固醇酯酶水解和熒光染料菲律賓(FILIPIN)特異性與游離膽固醇反應(yīng),形成復(fù)合體,并產(chǎn)生藍(lán)色

熒光,分析石蠟包埋組織切片中總膽固醇的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明

的。主要適用于各種人體和動(dòng)物組織石蠟切片中總膽固醇的檢測(cè)。廣泛用于組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)

格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,熒光清晰。 技術(shù)背景

膽固醇(cholesterol)是一類(lèi)稱(chēng)之為固醇類(lèi)(sterols)或聚類(lèi)異戊二烯(polyisoprenoid)或三萜皂甙元(triterpene)

的多環(huán)化合物(polycyclic compound)。其分子式為 cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離(free form)和脂化結(jié)

合(ester)兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中,主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝

以及激素合成中起著重要作用。菲律賓(FILIPIN)是一類(lèi)由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素(polyene

antibiotics)或多馬霉素(polyene macrolide)的總稱(chēng)。源自于 S. FILIPINENSIS 細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式

為 C35H58O11,分子量為 654.8。首先在膽固醇酯酶(cholesterol esterase)的水解下,酯化膽固醇(cholesterel ester)轉(zhuǎn)化為游離膽固醇,然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物,產(chǎn)生熒光。由于

石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過(guò)程中,有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分,因此

使用非二甲苯類(lèi)脫蠟,以保護(hù)組織中的膽固醇成分是菲律賓染色的關(guān)鍵。 產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液(Reagent A) 20 毫升

凈化液(Reagent B) 5 毫升

清理液(Reagent C) 20 毫升

水解液(Reagent D) 4 毫升

抗干擾液(Reagent E) 4 毫升

染色液(Reagent F) 2 毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1 份

保存方式

保存水解液(Reagent D)和染色液(Reagent F)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在 4℃冰箱里;

有效保證 6 月

用戶(hù)自備

熒光顯微鏡:用于樣品染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 脫蠟處理

1. 取出待測(cè)的 6 微米厚的石蠟包埋的組織切片

2. 放進(jìn) 80℃烘箱,孵育 30 分鐘

3. 取出組織切片

4. 小心加上 500 微升脫蠟液(Reagent A)在切片上,鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面(注意:使用前,搖勻脫蠟

液)

5. 放進(jìn) 70℃恒溫培養(yǎng)箱里孵育 5 分鐘

6. 即刻小心移去切片上的脫蠟液(Reagent A)

7. (選擇步驟)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 2 至 4 一次

8. 小心加上 200 微升凈化液(Reagent B)在切片上,鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面

9. 室溫下孵育 2 分鐘

10.小心移去切片上的凈化液(Reagent B)

11.進(jìn)一步依次常規(guī)凈化處理:用戶(hù)自備的 100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇

12.小心加上 200 微升清理液(Reagent C)在切片上,鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面

13.室溫下孵育 3 分鐘

14.小心移去切片上的清理液(Reagent C)

三、樣本染色處理

1. 小心加入 200 微升水解液(Reagent C),鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面

2. 室溫下孵育 1 小時(shí)(注意:可以延長(zhǎng)至 4 小時(shí),避免干枯)

3. 小心移去水解液(Reagent D)

4. 小心加入 200 微升清理液(Reagent C),清洗樣品表面

5. 小心移去清理液(Reagent C)

6. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 4 至 5 一次

7. 小心加上 200 微升抗干擾液(Reagent E),鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面

8. 室溫下孵育 10 分鐘

9. 小心移去切片上的抗干擾液(Reagent E)

10.小心加上 100 微升染色液(Reagent F),鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面

11.室溫下孵育 30 分鐘,避免光照

12.小心移去切片上的染色液(Reagent F)

13.小心加上 200 微升清理液(Reagent C),清洗樣品表面

14.小心移去切片上的清理液(Reagent C)

15.重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 13 至 14 二次

16.即刻放上蓋玻片或封片

17.在熒光顯微鏡下觀察:激發(fā)波長(zhǎng):340nm;散發(fā)波長(zhǎng):430nm――膽固醇陽(yáng)性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品為 20 次操作

2. 操作時(shí),須戴手套

3. 建議用戶(hù)避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片,即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理

2

3

4. 操作時(shí),避免污染母液

5. 試劑溶液在樣品表面時(shí),避免有氣泡存在,同時(shí)確保鋪滿(mǎn)樣品表面

6. 熒光容易受到光漂白(photobleach),建議使用抗淬滅劑Ⅰ-12058.2

7. 樣品染色完成后,即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察

8. 本公司提供系列組織細(xì)胞膽固醇染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰


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