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酶聯(lián)免疫測定技術(shù)(ELISA)的放大系統(tǒng)
閱讀：855 發(fā)布時間：2023-5-31 酶免疫測定自20世紀70年代初創(chuàng)立以來，由于其具有特異、靈敏、簡便、快速的特點，現(xiàn)已在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域及臨床疾病的診療中得到了廣泛的應(yīng)用，相對于放射免疫測定(RIA)技術(shù)來說，EIA還有試劑半衰期長，對環(huán)境污染小，試驗廢物易于處理等優(yōu)點，但測定敏感性一般較RIA低，于是，為提高EIA的測定敏感性，出現(xiàn)了眾多的EIA測定放大系統(tǒng)，使EIA的測定敏感性趕上甚或超過了RIA。
建立正IA測定放大系統(tǒng)的一般原則
EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)等]作標記物的，因此，EIA的測定放大始終是圍繞著標記酶來作文章的，不外乎三種可能的方式：①增加標記酶的量；②非顯色底物的應(yīng)用；③附加一個受標記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)。
一、增加標記酶的量
通過生物素／親合素—酶或酶／抗酶復(fù)合物的間接方法，可以增加ELISA測定中最后所測定的標記酶的量。這種方法雖在一定程度上由于標記酶的聚集增加了EIA的測定敏感性，但同時有增加非特異的背景顯色的可能。
二、非顯色底物的應(yīng)用
從酶的反應(yīng)底物著手，使用具有高測定敏感性的非顯色底物如熒光素或發(fā)光物，從而提高EIA的測定敏感性，這種方法的優(yōu)點是不需額外的步驟及試劑制備，缺點是需要特殊的測定儀器。
三、附加一個受標記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)
原始標記酶催化附加一個反應(yīng)系統(tǒng)，如酶底物反應(yīng)循環(huán)或酶級聯(lián)反應(yīng)，從而達到反應(yīng)放大的目的。這種由數(shù)個催化反應(yīng)的耦聯(lián)而構(gòu)建的放大系統(tǒng)，是酶放大的根本之所在，敏感性的提高來源于真正的信號放大，而不是簡單地將一個分子轉(zhuǎn)變?yōu)楦嗟囊子跍y定的分子。一個適用的酶放大系統(tǒng)的選擇除了要考慮生化因素外，最為重要的是酶及其底物的穩(wěn)定性，并要易于獲得，因其對試驗的準確性和重復(fù)性有較大的影響。