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ELISA試劑盒檢測方法的原理

閱讀:2598發(fā)布時間:2016-6-20

目前,酶聯(lián)免疫(ELISA試劑盒)檢測技術廣泛用于免疫學、微生物學、寄生蟲學等。由于其具有靈敏度高、試劑穩(wěn)定、設備簡單、操作安全等優(yōu)點,近幾年也將其應用到食品領域中來檢測某些食品中的生理活性物質。


酶聯(lián)免疫吸附法(elisa試劑盒檢測方法)原理:

原理:ELISA可用于測定抗體,也可用于檢測杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應,用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。3種必要的試劑: ①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑); ②酶標記的抗原或抗體(標記物); ③酶作用的底物(顯色劑)。

ELISA過程包括:抗原吸附在固相載體上,這個過程稱為包被,加待測抗體, 再加相應酶標記抗體,生成抗原--待測抗體--酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計的光吸收計算抗體的量。


根據(jù)檢測目的和操作步驟不同,有以下三種類型的常用方法:

1.間接法 
此法是測定抗體zui常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標本(含相應抗體)與之結合。洗滌后,加人酶標抗球蛋白抗體(酶標抗抗體)和底物進行測定。

2.雙抗體夾心法 
此法常用于測定抗原。將已知抗體吸附于固相載體,加人待檢標本(含相應抗原)與之結合。溫育后洗滌,加人酶標板中。

3.競爭法 
此法可用于抗原和半抗原的定量測定,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體。加入待測抗原和一定量的酶標已知抗原,使二者竟爭與固相抗體結合;經(jīng)過洗滌分離,zui后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關。


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