聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級會員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機(jī)：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
- 個性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
巢式PCR
標(biāo)簽： 巢式 PCR
巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），使用兩對（而非一對）PCR引物擴(kuò)增完整的片段。*對PCR引物擴(kuò)增片段和普通PCR相似。第二對引物稱為巢式引物（因為他們在*次PCR擴(kuò)增片段的內(nèi)部）結(jié)合在*次PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次PCR擴(kuò)增片段短于*次擴(kuò)增。
實驗方法
- 基本方案
| 實驗方法原理 | 由于巢式PCR反應(yīng)有兩次PCR擴(kuò)增，從而降低了擴(kuò)增多個靶位點的可能性（因為與兩套引物都互補(bǔ)的引物很少）增加了檢測的敏感性；又有兩對PCR引物與檢測模板的配對，增加了檢測的可靠性。 由于第二套引物位于*輪PCR產(chǎn)物內(nèi)部，而非目的片斷包含兩套引物結(jié)合位點的可能性極小，因此第二套引物不可能擴(kuò)增非目的片斷。這種巢式PCR擴(kuò)增確保第二輪PCR產(chǎn)物幾乎或者*沒有引物配對特異性不強(qiáng)造成的非特異性擴(kuò)增的污染。
巢式PCR反應(yīng)模式圖 |
|---|---|
| 實驗材料 | 基因樣品 |
| 試劑、試劑盒 | PCR緩沖液 Tris·HCl KCl Taq聚合酶 |
| 儀器、耗材 | PCR儀 |
| 實驗步驟 | 1. 目標(biāo)的DNA模板藍(lán)色的*對引物結(jié)合。*對引物也可能結(jié)合到其他具有相似結(jié)合位點的片段上并擴(kuò)增多種產(chǎn)物。但只有一種產(chǎn)物是目的片斷（圖中未顯示可能的多種產(chǎn)物）。
|
| 注意事項 | 1. 引物設(shè)計原則：每個特異性引物為24~26個堿基，Tm：64-65%，GC：44-55% 。這樣你可以同時做多個不同的TAIL PCR。
|
| 其他 | 1. 圖解
|
