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DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù):凍融法回收DNA片段操作步驟

2013-8-6  閱讀(1609)

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1.  紫外燈下仔細(xì)切下含待回收DNA的膠條,將切下的膠條(小于0.6g)搗碎,置于1.5ml離心管中;

2.  加入等體積的Tris-HCl飽和酚(pH 7.6),振蕩混勻;

3.  -20℃放置5-10min;

4.  4℃離心10000g×5min,上層液轉(zhuǎn)移置另一離心管中;

5.  加入1/4體積H2O于含膠的離心管中,振蕩混勻;

6.  -20℃,放置5-10min;

7.  4℃離心10000g×5min,合并上清液;

8.  用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次,取上清;

9.  加入1/10體積3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍體積預(yù)冷的無(wú)水乙醇,混勻;

10. -20℃,靜置30min;

11. 4℃離心13000g×10min,棄上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;

12.  加適量H2O或TE溶解沉淀。

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