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BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明
點擊次數：6186 發(fā)布時間：2016-3-23
試劑盒組成 | 包裝(500微孔) | 保存 |
BCA試劑 | 100ml | 2-8℃ |
Cu試劑 | 3ml | 2-8℃ |
PBS稀釋液 | 30ml | 2-8℃ |
BSA蛋白標準 (5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
本試劑盒自訂購之日起一年內有效。本試劑盒用于酶標板或者200ul比色皿時可做500孔。當使用2ml比色皿時可做50孔，如果是1ml比色皿時可做100孔。
產品簡介
堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發(fā)現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
使用說明
一，微孔酶標儀法
1. 配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內穩(wěn)定。
2. 稀釋標準品：取10微升BSA標準品用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標準品孔中，加PBS補足到20微升。
3. 將樣品作適當稀釋（多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。
4. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分鐘。用酶標儀測定A562nm，根據標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時，應注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結果。
二，分光光度計法
如沒有酶標儀，可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。
步驟如下：
1．配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內穩(wěn)定。
2， 稀釋標準品：取100微升BSA標準品用PBS稀釋至1ml（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。
3， 取八支（或者更多）5ml離心管，標讓號，按下表加入試劑。
離心管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（樣品管1） | 8（樣品管2） | 9（樣品管3） |
標準蛋白BSA | 0 | 40ul | 80ul | 120ul | 160ul | 200ul | 200ul適當稀釋的樣品1 | 樣品2 | …… |
PBS | 200ul | 160ul | 120ul | 80ul | 40ul | 0 | 0 | 0 | 0 |
BCA工作液 | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |
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4， 37℃放置15-30分鐘。用分光光度計測562nm處吸光值，根據標準曲線計算出蛋白濃度。