一、物質(zhì)名稱

• 英文名稱：DyLight 633 Maleimide Phalloidin

• 中文名稱：DyLight 633 馬來酰亞胺鬼筆環(huán)肽

二、基本概述

DyLight 633 馬來酰亞胺鬼筆環(huán)肽是一種熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽衍生物，由天然鬼筆環(huán)肽與DyLight 633熒光染料通過馬來酰亞胺基團(tuán)共價(jià)結(jié)合而成。其主要用于細(xì)胞骨架中肌動(dòng)蛋白（F-actin）的特異性標(biāo)記，在熒光顯微鏡成像中提供紅色至遠(yuǎn)紅色熒光信號(hào)。

三、制備步驟

1. 原料準(zhǔn)備

• 鬼筆環(huán)肽提?。簭闹旅巨Γㄈ琦Z膏菌屬）中分離純化天然鬼筆環(huán)肽，通過色譜技術(shù)（如HPLC）獲得高純度單體。

• DyLight 633染料合成：基于磺化菁染料骨架，通過化學(xué)修飾引入馬來酰亞胺反應(yīng)基團(tuán)，合成DyLight 633馬來酰亞胺染料。

2. 鬼筆環(huán)肽活化

• 保護(hù)基團(tuán)處理：若鬼筆環(huán)肽含游離巰基或其他活性基團(tuán)，需通過乙?；蜱牾；忾]非目標(biāo)位點(diǎn)，確保馬來酰亞胺僅與特定殘基（如半胱氨酸）結(jié)合。

• 馬來酰亞胺修飾：將鬼筆環(huán)肽與馬來酰亞胺活化中間體（如N-羥基琥珀酰亞胺馬來酰亞胺酯）在堿性緩沖液（pH 7.4-8.0）中反應(yīng)，形成馬來酰亞胺-鬼筆環(huán)肽中間體。

3. 熒光染料偶聯(lián)

• 共價(jià)結(jié)合：將DyLight 633馬來酰亞胺染料與馬來酰亞胺-鬼筆環(huán)肽中間體在室溫下避光孵育（通常4-12小時(shí)），通過硫醚鍵形成穩(wěn)定共價(jià)連接。

• 純化分離：通過凝膠過濾色譜（如Sephadex G-25）或離子交換色譜去除未反應(yīng)的染料和副產(chǎn)物，獲得純化的DyLight 633馬來酰亞胺鬼筆環(huán)肽。

4. 質(zhì)量控制

• 純度檢測(cè)：采用HPLC或SDS-PAGE驗(yàn)證產(chǎn)物純度，確保無游離染料或未標(biāo)記鬼筆環(huán)肽殘留。

• 熒光特性驗(yàn)證：通過紫外-可見光譜和熒光分光光度計(jì)確認(rèn)DyLight 633的激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)（約633 nm/650 nm附近）。

四、特性與注意事項(xiàng)

• 特異性結(jié)合：鬼筆環(huán)肽部分通過靜電作用與F-actin緊密結(jié)合，DyLight 633提供穩(wěn)定熒光信號(hào)，適用于固定細(xì)胞或組織的成像。

• 光穩(wěn)定性：DyLight 633染料具有較高的光穩(wěn)定性，適合長(zhǎng)時(shí)間曝光成像。

• 儲(chǔ)存條件：需避光保存于-20℃干燥環(huán)境中，避免反復(fù)凍融。

五、應(yīng)用背景

該標(biāo)記物通過鬼筆環(huán)肽的高親和力與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，在細(xì)胞生物學(xué)研究中用于觀察細(xì)胞形態(tài)、遷移及應(yīng)力纖維分布，輔助理解細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)變化機(jī)制。其熒光特性適配多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，可與綠色或藍(lán)色熒光探針聯(lián)合使用。

產(chǎn)地：西安瑞禧生物

用途：科研

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