先制備McAb-四環(huán)素的偶聯物:用辛酸一硫酸胺法提取并純化.McAb;取已氧化的Dexteran T1o 600mg與四環(huán)素400mg混溶于10mL的PBS溶液中，加入68mg.McAb,4C攪拌24h,加入200μL NaHB,(1 g/L).4℃攪拌4h,用1 000r/min離心30min。以Sephadex Gzs層析柱分離,旅縮,低溫保存McAb---四環(huán)素偶聯物。 McAb的活性檢測;按Dowielard法。

將己包被布魯氏菌破碎抗原的聚苯乙烯板4'C過夜，(100pL/孔)加不同稀釋倍數McAb.室溫反應1h,沖洗,加兔抗鼠IgG-HRP結合物，37C反應1h,洗滌后加底物顯色。偶聯物穩(wěn)定測定:將偶聯物6mg溶于6mLPBS溶液中,過濾后置4'C冰箱保存,分別在偶聯四環(huán)素制劑進行抑制布魯氏菌的測試。

四環(huán)素偶聯制劑的特異性檢測:分別用測定劑量單位的各制劑(McAb、四環(huán)素、McAb-四環(huán)素偶聯物、胰滅活的偶聯物)對1000個沙門氏菌、布魯氏菌、牛I型大腸桿菌進行作用,觀察其特異性效果。

McAb-四環(huán)素偶聯物的分離純化:偶聯物用.Sephadex G2;分離獲兩種產物,用紫外分光光度計測定280nm和440nm波長的OD值,在280nm處有一個大的吸收峰,另一峰為無McAb活性的四環(huán)素吸收峰。

McAb-四環(huán)素偶聯物的穩(wěn)定性測定:用保存1~20d的制劑與牛I型布魯氏菌作用2h, 單抗與偶聯物制劑具有相同的作用,四環(huán)素作用保持1d。

結果表明,用上述方法將McAb與四環(huán)素偶聯制備成的偶聯制劑,不但保留了抗體結合抗原的活性,而且保留了四環(huán)素的活性。我們利用偶聯制劑上抗體的這種特性,可以將四環(huán)素特異性的導向布魯氏菌的靶部位,使得該部位的濃度相對提，地發(fā)揮的作用。

相關內容：

偶聯抗CD4mAb的載西格列汀聚合物納米粒

透明質酸與多肽原性偶聯物

伊維菌素衍生物和抗阿維菌素類的單克隆抗體

靶向HER3適配體-阿霉素偶聯物

匙孔血藍蛋白(KLH)偶聯多肽抗原HBx-d382P-KLH

人源化抗ROR1抗體及其AGAP偶聯物

抗HSV1單克隆抗體-阿糖胞苷偶聯物

抗-CD19類美登素偶聯

DMAC-SPDB-磺基      DMAC-SPDB-sulfo

BCN-SS-NHS

以上內容均為瑞禧生物小編zhq提供