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人elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)操作流程
閱讀：98 發(fā)布時(shí)間：2016-9-27人ELISA試劑盒雙抗夾心法操作流程：
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
人ELISA試劑盒檢測未知抗體的間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌；
6.’zui后一遍用DDW洗滌。
7.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
8.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
9.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
IFN- Beta (Interferon Beta) human 干擾素-β抗原
PSCA 前列腺干細(xì)胞抗原
Agrin peptide 聚集蛋白抗原
ATP citrate lyase/ACLY 三磷酸腺檸檬酸裂解酶
AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1) 脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1
phospho-AMPK alpha 1(Thr172) peptaide 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1
ADM 1-52/AM 1-52/Adrenomedullin 1-52 腎上腺髓質(zhì)素(1-52)
Amyloid protein precursor 淀粉樣肽前體蛋白（多肽抗原）
ACTH(1-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)
Adiponectin 脂聯(lián)素（多肽抗原）
Acetyl CoA Carboxylase 乙酰輔酶A羧化酶
Alkaline Phosphatase/ALP/AP 堿性磷酸酶
人ELISA試劑盒