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技術文章

ELISA系統(tǒng)更穩(wěn)定方法

閱讀:145          發(fā)布時間:2015-2-26

ELISA常用封鎖劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價廉,可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,看一下*可不可以應用到自己試驗當中去。但*選用什么,要依據(jù)試驗詳細來實踐。應留意以下原理:因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白,對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,親和素生物素:先親和素先包被載體,加入生物素化的DNA,這種包被方法平均、牢固,已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
    包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保留抗原很重要,我做重組蛋白時,師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。封鎖就是讓大量不相關的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時因為試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。

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