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技術(shù)文章

撫生試劑-ELISA(雙抗體夾心法)—檢測HBsAg

閱讀:167          發(fā)布時間:2014-4-3

 

ELISA(雙抗體夾心法)—檢測HBsAg
【摘要】:以已知抗體(抗HBs)包被載體,然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入,共同孵育后,抗原結(jié)合于包被抗體上,再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs),酶標(biāo)抗體連接到抗原上,zui后加入底物溶液,根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。 【材料】HBsAg試劑盒,本試劑盒含: 1、包被抗-HBs反應(yīng)條 1瓶 2、酶結(jié)合物 1瓶 3、HBsAg陽性對照 1瓶 4、HBsAg陰性對照 1瓶 5、洗滌液:用前每瓶作1:20稀釋 1瓶 6、顯色劑(
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【材料】HBsAg試劑盒,本試劑盒含:

1、包被抗-HBs反應(yīng)條

1瓶

2、酶結(jié)合物

1瓶

3、HBSAg陽性對照

1瓶

4、HBsAg陰性對照

1瓶

5、洗滌液:用前每瓶作1:20稀釋

1瓶

6、顯色劑(TMB)A

1瓶

7、顯色劑(TMB)B

1瓶

8、終止液

1瓶

【方法】

1、加入待測標(biāo)本每孔0.05ml,并設(shè)HBsAg陽性對照2孔,HBsAg陰性對照2孔,空白對照1孔,然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加),充分混勻后置37℃孵育30分鐘。

2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔,棄去拍干,反復(fù)五次后拍干。

3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),混勻,37℃孵育10分鐘。

4、每孔加終止液1滴(0.05ml),混勻。

【結(jié)果】

比色法:波長450nm,先用空白孔校零點(diǎn),然后讀取各孔光密度值。

樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性,否則為陰性。

備注:陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算,高于0.05按實(shí)際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8,實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

【注意事項(xiàng)】

1、試劑盒置2℃~8℃保存。

2、使用前試劑應(yīng)搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加。

3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔條,置室溫平衡30分鐘后再行測試,余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。

4、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。

5、不同批號試劑請勿通用。

6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。

7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時,請置37℃至溶解。

 

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