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組織培養(yǎng)消除污染的實驗步驟
閱讀：374 發(fā)布時間：2021-10-11當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。
首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。
下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟:
（1）在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。
（2）分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0 mg/ml。
（3）每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
（4）確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2－3代。
（5）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
（6）重復步驟4。
（7）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6代，確定污染是否已被消除。