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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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酸性羧甲基纖維素酶活力含量測(cè)定紫外分光光度法

時(shí)間:2016-6-22閱讀:4253
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〔含量測(cè)定〕酸性羧甲基纖維素酶活力對(duì)照品溶液的

制備取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加水制成每lml

3mg的溶液,即得。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液L 0ml、2。0ml、

4. 0ml、6. 0ml8。0ml,分別置10ml量瓶中,各加水至刻度,搖__

勻。分別精密量取上述溶液各0= 5mU25ml具塞刻度試管

中,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液pH t 8)1。5mU混勻,立即精密

加人3,5-二硝基水楊酸試液15ml,搖勻5置沸水浴中保溫15

分鐘,取出,置冰水浴中冷卻10分鐘,再加水至刻度,搖勻,靜

90分鐘,以相應(yīng)的試劑為空白,照紫外-可見(jiàn)分光光度法

(通則0401),在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐

標(biāo),葡萄糖量(mg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

測(cè)定法取本品約LOg,精密稱(chēng)定9置具塞錐形瓶中,精

密加水100ml,密塞,旋轉(zhuǎn)振搖(轉(zhuǎn)速每分鐘200轉(zhuǎn))6 0

鐘,濾過(guò),作為供試品溶液(本液應(yīng)臨用新制)。精密量取

1%羧甲基纖維素鈉溶液1。5ml,置25ml具塞刻度試管中,

精密加人供試品溶液0. 5mU混勻550°C水浴中保溫30

鐘,取出n照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下的方法,自立即精密加人3,

5-二硝基水楊酸溶液L 50115依法測(cè)定吸光度5從標(biāo)準(zhǔn)曲

線(xiàn)上讀出供試品溶液中含還原糖的重量(mg)??瞻坠芗?/span>

1%羧甲基纖維素鈉溶液15ml,置50°C水浴中保溫30

分鐘,取出,立即精密加人3,5-二硝基水楊酸試液L 5ml9

搖勻,精密加人供試品溶液0。5ml,混勻,照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備

項(xiàng)下的方法,自置沸水浴中保溫1 5分鐘起,依法進(jìn)行。

按下式計(jì)算:

X = A X l /0 . 5X100/W 1一水分)X2

式中X 酸性羧甲基纖維素酶活力,U /gl

A 吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得的還原糖量,mg;

W 取樣量

2 時(shí)間換算系數(shù)。

l g 固體酶在50°C±l°CpH4. 8 條件下,1 小時(shí)水解1%

羧甲基纖維素鈉底物,產(chǎn)生出相當(dāng)于lm g葡萄糖的還原糖量

為一個(gè)酸性羧甲基纖維素酶活力單位,以U /g表示。

本品按干燥品計(jì)算,每l g 含酸性羧甲基纖維素酶活力不

得低于150U

 

注:[1]3,5-二硝基水楊酸試液:取苯酚6。9g,加10%

氧化鈉溶液15ml使溶解,用水稀釋至70ml,搖勻,再加亞硫

酸氫鈉6. 9g,振搖使溶解(甲液取酒石酸鉀鈉255g,加

10%氫氧化鈉溶液300ml使溶解,再加1%3,5-二硝基水

楊酸溶液880ml9搖勻(乙液);將甲液與乙液混合5搖勻,得黃

色的溶液,貯于棕色瓶中,4°C放置7 天,備用。

[2]構(gòu)櫞酸鹽緩沖液pH 4. 8) :分別精密量取0. 5mol/L

枸櫞酸溶液60ml0. 5mol/L枸櫞酸三鈉溶液100ml,混勻,精

密量取上述溶液100ml,加水800ml,3mol/L鹽酸溶液或

3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)p H 值至48,移至1000ml量瓶

中,加水至刻度,搖勻,即得。

[3]1%羧甲基纖維素鈉溶液;精密稱(chēng)取l .O g羧甲基纖維

素鈉,置具塞錐形瓶中,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)

80ml,稱(chēng)定重量,85°C±5°C邊加熱邊磁力攪拌至*溶解,

放冷,再稱(chēng)定重量,用枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)補(bǔ)足減失的重

量,搖勻,以3mol/L鹽酸溶液或3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)

p H值至4. 8,移至100ml量瓶中,加枸櫞酸鹽緩沖液

(pH4.8)至刻度9搖勻,即得。

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