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gⅥ-cDNA噬菌粒文庫(kù)小規(guī)模的獲取和純化

2013-1-4  閱讀(1097)

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[方法]
1.將克隆體接種到100ul LBAT 96孔培養(yǎng)板上,并在37℃過(guò)夜振蕩培養(yǎng)(180r/min)。
2.使用96孔復(fù)制板將其接種到裝有200ul LBAT的第二塊96孔培養(yǎng)板上,在37℃培養(yǎng)直到生長(zhǎng)中期(大約1,5小時(shí))。
3.在每一孔中加入10ul 2×1011TU/mlR408輔助噬菌體。
4.37℃無(wú)振蕩培養(yǎng)30分鐘。
5.37℃過(guò)夜振蕩培養(yǎng)。
6.4℃800g離心20分鐘,收集細(xì)胞。
7.將上清液轉(zhuǎn)移到一新的96孔培養(yǎng)板上,并加40pul PEG/NaCl。
8.將板放置于冰上1小時(shí)。
9.4℃800g離心20分鐘,收集噬菌體顆粒,小心除去上清液,在50ulPBS溶液中打散顆粒。

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