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在流式細(xì)胞儀中使用抗體對蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色，為研究和臨床診斷中的細(xì)胞表型和功能表征提供了多種新選擇。

實際上，某些細(xì)胞類型的明確表型鑒定可能需要同時標(biāo)記細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物。另外，典型膜分子的胞質(zhì)定位可以證明是可靠的譜系標(biāo)志物，例如未分化白血病中的胞質(zhì)CD3和CD22。

在這種情況下，對于許多其他細(xì)胞生物學(xué)和功能研究，必須進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)免疫染色。為此，Nordic-MUbio提供了細(xì)胞固定和通透試劑盒FIX＆PERM®，與流式細(xì)胞術(shù)中細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞染色的其他方法相比，它具有許多優(yōu)勢。

FIX＆PERM®

溫和固定細(xì)胞，保留其流式細(xì)胞儀散射特征
允許同時表征細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面標(biāo)記
快速的技術(shù)–整個過程可以在不到一小時的時間內(nèi)完成，可以立即進(jìn)行分析或存儲24小時
嚴(yán)格的質(zhì)量控制程序–使用定義明確的血液樣本并隨后比較獲得的白細(xì)胞群的散射特征來確定每批樣品的質(zhì)量，從而確保一批又一批的結(jié)果一致且可靠
一系列具有優(yōu)化方案的細(xì)胞內(nèi)抗體，可與FIX＆PERM®一起使用

FIX＆PERM®是使用兩種試劑的簡單程序。試劑A輕輕固定細(xì)胞，而試劑B透化細(xì)胞。特定的制劑可降低背景并允許同時添加通透性培養(yǎng)基和熒光染料標(biāo)記的抗體，從而可以對細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞質(zhì)或核酶，癌蛋白，細(xì)胞因子，免疫球蛋白等）進(jìn)行染色。

程序

對于每個要分析的樣品，在5 ml試管中使用50 µl全血，骨髓或單核細(xì)胞懸浮液

加入100 µl試劑A（固定介質(zhì)，室溫下保存和使用）
在室溫下孵育15分鐘
加入5 ml磷酸鹽緩沖鹽水并以300 g離心5分鐘
除去上清液，并向細(xì)胞沉淀中加入100 µl試劑B（通透性培養(yǎng)基）和20 µl適當(dāng)?shù)膯慰寺】贵w偶聯(lián)物
低速渦旋1-2秒
在室溫下孵育15分鐘
如上所述，用磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞
除去上清液并將細(xì)胞重懸于鞘液中以便立即分析，或?qū)⒓?xì)胞重懸于0.5 ml 1.0％甲醛中，并在黑暗中于2-8°C儲存
在24小時內(nèi)分析固定細(xì)胞

為與FIX＆PERM®一起使用而優(yōu)化的產(chǎn)品

大多數(shù)可用的單克隆抗體偶聯(lián)物均可與FIX一起使用。但是，在某些情況下，可能必須優(yōu)化固定步驟。

Nordic-MUbio提供了多種針對FIX＆PERM®而優(yōu)化的小鼠抗人偶聯(lián)（PE / FITC）單克隆抗體。

Antigen	Clone	Isotype	Format	Quantity	Cat. No.
CD3	UCHT1	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4011
			FITC-labeled	100 tests	GM-4012
			PE-labeled	100 tests	GM-4013
CD22	RFB4	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4051
			FITC-labeled	100 tests	GM-4052
			PE-labeled	100 tests	GM-4053
Lactoferrin	4C5	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4111
			PE-labeled	100 tests	GM-4113
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4191
(MPO-C2)			FITC-labeled	100 tests	GM-4192
			PE-labeled	100 tests	GM-4193
Lysozyme	LZ-2	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4131
			FITC-labeled	100 tests	GM-4132
CD68	Ki-M7	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4152
IL-1 beta	FIB3	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4162
IFN-gamma	GZ4	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4172

Furthermore, a number of Combi panels are offered for dual immunostaining protocols.

Antigen	Clone	Isotype	Format	Quantity	Cat. No.
Negative control	Vl-AP	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-201
	Vl-AP	IgG1	PE-labeled		-
Lysozyme	LZ-2	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-206
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled		-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-212
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled		-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-213
CD3	UCHT1	IgG1	PE-labeled		-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-214
CD22	RFB4	IgG1	PE-labeled

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