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abvector ＃H15說(shuō)明書
| FoldHelper™-104和FoldHelper™-104P |
＃H15和＃H16 | |
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| 圖1. Hsp104在用FoldHelper™-104感染的昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)。 感染后60小時(shí)收獲 Spodoptera frigiperda Sf9細(xì)胞，在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150 mM EDTA，0.5％NP-40中溶解，并通過(guò)在30,000g下離心15分鐘去除不溶級(jí)分。可溶性蛋白在11％SDS-PAGE中分離，并用考馬斯亮蘭染色。NC陰性對(duì)照桿狀病毒，不表達(dá)任何外源蛋白質(zhì)或多面體蛋白（目錄號(hào)C13）。 | 推薦用途： 與任何產(chǎn)生細(xì)胞質(zhì) 蛋白聚集體的重組桿狀病毒共感染。 | |
| FoldHelper™-104提供酵母Hsp104（Acc＃AAA50477）的表達(dá)。Hsp104屬于分子伴侶的Hsp100 / Clp組，其可用作逆轉(zhuǎn)而不是防止蛋白質(zhì)聚集的工具（Glover JR和Tkach，JM，Biochem.Cell Biol。，79：557-568，2001）。Hsp104具有重塑活性，可作用于捕獲的聚集蛋白。Hsp104需要與特別是屬于Hsp40和Hsp70家族的常規(guī)伴侶進(jìn)行特定的相互作用，以促進(jìn)其產(chǎn)生的中間體的重折疊（Glover JR和Lindquist S.，Cell，94：73-82，1998）。酵母Hsp104可以在異源系統(tǒng)中起作用，例如，它可以減少哺乳動(dòng)物細(xì)胞中外源蛋白的聚集（Bao YP等，J.Biol.Chem。，277：12263-12269，2002）。 FoldHelper™-104P提供與FoldHelper™-104相同水平的Hsp104表達(dá)。另外，它提供了蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（PDI）（Acc＃CAA28775）的高水平表達(dá)。已證明PDI在體外氧化蛋白折疊中是有效的（Weissman，JS和Kim PS，Nature，365：185-188，1993）。PDI具有多種功能，盡管在ER中豐富，但也存在于細(xì)胞質(zhì)中（Turano，C。等，J.Cell.Physiol。，193：154-163，2002）。 盡管PDI在感染了重組桿狀病毒的昆蟲(chóng)細(xì)胞中具有無(wú)法解釋的作用，但令人歡迎的是PDI可以提高此類細(xì)胞的壽命。這種細(xì)胞病變效應(yīng)在表達(dá)高水平PDI的受感染細(xì)胞中明顯不明顯，并且這種細(xì)胞比未提供PDI表達(dá)的對(duì)照病毒感染的細(xì)胞存活約24小時(shí)。類似地，哺乳動(dòng)物細(xì)胞中PDI的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致重組蛋白生產(chǎn)的壽命延長(zhǎng)和時(shí)間延長(zhǎng)（Kitchin，K和Flickinger，MC，Biotechnol.Progr。，11：565-574，1995）。 如果您尚未使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（也稱為桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)或BEVS）工作，可以在TECHNOLOGY上進(jìn)行快速更新。轉(zhuǎn)到BACULOVIRUS教程有關(guān)桿狀病毒轉(zhuǎn)染，重組桿狀病毒繁殖和重組桿狀病毒蛋白表達(dá)研究的簡(jiǎn)單在線說(shuō)明。 | ||
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