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電泳Marker問(wèn)題集錦
Q：為什么marker條帶非常模糊，無(wú)法辨別具體條帶？
A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個(gè)原因：
1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請(qǐng)確保在使用過(guò)程中避免核酸酶污染；
2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；
3. 電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不*過(guò)20V/cm，溫度應(yīng)低于30℃；
4. marker上樣量過(guò)多。請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)選用合適上樣量；
5. 凝膠質(zhì)量不好。建議使用質(zhì)量較好的瓊脂糖；此外，凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致條帶模糊。
Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？
A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個(gè)原因有關(guān)：
1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；
2. 電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不*過(guò)20V/cm，電壓太高可能也會(huì)導(dǎo)致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外，凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時(shí)凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致該現(xiàn)象出現(xiàn)。
Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒(méi)有條帶？
A：出現(xiàn)上述情況可能是：
1. marker上樣量較低，可適當(dāng)增加上樣量；
2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致電泳條帶弱或根本沒(méi)有條帶；
3. 電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增加凝膠濃度。
Q：為什么marker缺帶？
A：對(duì)于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因?yàn)椋?nbsp;
1. 小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認(rèn)所致，可適當(dāng)縮短電泳時(shí)間，降低電壓，同時(shí)增加凝膠濃度；
2. 凝膠中EB含量過(guò)低，導(dǎo)致大片段結(jié)合EB量太少或沒(méi)有，在紫外光下亮度太低，可適當(dāng)增加EB用量。