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技術(shù)文章

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的具體操作方法

閱讀:1144          發(fā)布時間:2014-3-6

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的具體操作方法
基本原理 
通過在支持物(如蓋玻片)上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞,可以應(yīng)用抗體檢測細(xì)胞表面抗原的表達(dá)或進行酶細(xì)胞化學(xué)以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。該方法的優(yōu)點是細(xì)胞貼壁牢固,能夠維持細(xì)胞生長時的狀態(tài)。
試劑和設(shè)備
細(xì)胞懸浮液;
6孔平底組織培養(yǎng)板,或φ60 mm培養(yǎng)皿;
18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片;
含血清培養(yǎng)基(通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素);
超凈工作臺; CO2孵箱;
蓋片鑷;
操作步驟
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
 

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