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目前酶聯(lián)免疫法檢測用試劑盒種類繁多，在實(shí)際檢測中發(fā)現(xiàn)，一般在試劑盒說明書中列出以下指標(biāo)：di檢測限；回收率；交叉反應(yīng)率；標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜及數(shù)據(jù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成；IC50測定值及變形曲線點(diǎn)數(shù)目的是比較規(guī)范的試劑盒，可以選擇。

1.臨界值(cut-off)的確定
在實(shí)際使用酶聯(lián)免疫法檢測時(shí)要首先確定臨界值。通過檢測結(jié)果與臨界值的比較，可判定樣品為陰性或可疑。對于禁用藥物，檢測方法的臨界值為定量限，即現(xiàn)有的*的儀器檢測所能達(dá)到的di定量限。對于有g(shù)ao殘留*(MRL)的藥物，檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測定的均值減去1．64倍標(biāo)準(zhǔn)差。檢測結(jié)果如小于臨界值為陰性，大于或等于臨界值或標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為可疑，需要用確證法確證。

2.檢測限的測定 可添加MRL和MRL上下各一個(gè)濃度。
每個(gè)試驗(yàn)室在使用酶聯(lián)免疫法檢測時(shí)，應(yīng)做一下各自試驗(yàn)室的檢測限。檢測限為20份空白樣品測定的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。如果經(jīng)規(guī)范操作后所得檢測限大于臨界值時(shí)，說明試劑盒背景干擾大，試劑盒靈敏度不能滿足檢測要求，應(yīng)與試劑盒廠家聯(lián)系或棄去不用選用另外的試劑盒。

3.酶聯(lián)免疫檢測方法驗(yàn)證
在使用酶聯(lián)免疫法檢測樣品時(shí)，應(yīng)對方法進(jìn)行驗(yàn)證。主要測定以下內(nèi)容：

①標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成，測定次數(shù)不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。一般臨界值為IC50附近，檢測靈敏度高。

②樣品檢測限的測定。

③樣品添加回收實(shí)驗(yàn)。對禁用藥物可添加定量限和2倍定量限，對于有g(shù)ao殘留*(MRL)的藥物，可添加MRL和MRL上下各一個(gè)濃度。

準(zhǔn)確度：若回收率大于40％符合相應(yīng)檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求。精密度：批內(nèi)變異系數(shù)每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25％，對于禁用藥物小于或等于30％。批間變異系數(shù)所有樣品間變異系數(shù)小于或等于30％，對于禁用藥物小于或等于40％。滿足以上準(zhǔn)確度和精密度要求，說明酶聯(lián)免疫方法可行，可用來檢測藥物殘留。

4.其他

①對于可用于多殘留檢測的試劑盒，以交叉反應(yīng)率低的藥物做陽性添加測定臨界值(cut-off)。

②實(shí)際檢測樣品時(shí)要包括以下實(shí)驗(yàn)：至少做兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，兩個(gè)陰性對照品，兩個(gè)添加臨界值(cut-off)的陽性對照品，兩個(gè)平行的待檢樣品。檢測結(jié)果出來后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線形狀(符合檢測要求為S形)，IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率，樣品平行情況可確定檢測是否可信。

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