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很多人都不知道的ELISA操作秘訣!
閱讀：1915 發(fā)布時(shí)間：2018-4-26 在上一篇技術(shù)資訊中，上海恒遠(yuǎn)為大家介紹了ELISA試劑盒質(zhì)量保證的重要條件，得到了不少客戶的反應(yīng)支持。昨日下午，我公司錢收到了技術(shù)部門歐陽總監(jiān)發(fā)來的技術(shù)研究，在這里分享給各位朋友們參考學(xué)習(xí)，下面一起來看看很多人都不知道的ELISA操作秘訣！
有2種方法來檢驗(yàn)試驗(yàn)的度：通常用變異系數(shù)來表示，①幾個(gè)樣品用ELISA法同時(shí)進(jìn)行多次測定求出CV%；②不同時(shí)間對不同操作者對某幾個(gè)樣進(jìn)行多次測定求出變異系數(shù)。CV是個(gè)體參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差與平均數(shù)的比率。
S/X＝CV，CV應(yīng)低10%，不應(yīng)大于10～15%。
不論目測或分光光度計(jì)測定，均可作一個(gè)稀釋度或一系列稀釋度測定，一般常規(guī)診斷只用一個(gè)稀釋度判斷陽性或陰性就可以了，這樣比較方便，現(xiàn)在推薦傳染病的血清診斷用1：200一個(gè)稀釋度。有些需要定量的，可作一系列稀釋度測定。
記錄結(jié)果有下列幾種方法：
1.“+”或“-”：所有超過規(guī)定的OD值(如OD，0.4)的標(biāo)本均屬陽性，此規(guī)定OD值是根據(jù)事先測定大量陰性標(biāo)本所取得的，此規(guī)定值是陰性標(biāo)本的上限?；蛘咭砸唤M陰性標(biāo)本OD平均值加2～3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差作為陽性閾值。
2.直接以O(shè)D值來表示，如0.4、0.7、1.2，OD值越大，陽性反應(yīng)越強(qiáng)，但此數(shù)值是在固定實(shí)驗(yàn)條件下得到的結(jié)果，而且每次實(shí)驗(yàn)都要有參考標(biāo)本作對照。
3.以終點(diǎn)滴度表示：將標(biāo)本作連續(xù)稀釋，zui高稀釋度能出現(xiàn)陽性反應(yīng)者(即OD值仍大于陽性閾值)，即為該標(biāo)本的滴度。
4.以“比值”表示：求出被檢標(biāo)本的OD值與一組陰性標(biāo)本OD值的比值，例如為陰性標(biāo)本的2倍或3倍，即為陽性，比值小于2.1而大于1.5為可疑，<1.5為陰性。
測定標(biāo)本OD值-空白OD值
如在此測定時(shí)以空白校正“O”點(diǎn)。
5.以“單位”來表示：在測定被檢標(biāo)本的同時(shí)，再測定一個(gè)含已知單位數(shù)的陽性參考血清，用不同稀釋度作ELISA檢測后，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，單位數(shù)為橫坐標(biāo)，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。以后可根據(jù)被檢標(biāo)本的OD值，從曲線上找出相應(yīng)的單位數(shù)，再乘于血清的稀釋倍數(shù)，即可得出被檢標(biāo)本的單位數(shù)。
作試驗(yàn)時(shí)的陰性參考血清zuihao不要顯色，否則會對結(jié)果判斷帶來困難，特別在目測時(shí)，當(dāng)陽性標(biāo)本OD值>2.0時(shí)，應(yīng)作適當(dāng)稀釋后再作測定。
上海恒遠(yuǎn)小貼士：在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中，所用儀器如吸管、燒杯試管都要清潔，用于酶結(jié)合和底物的吸管和容器一定要分開。試劑要求標(biāo)準(zhǔn)化。