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北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司
中級(jí)會(huì)員·12年
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SMOBIO蛋白marker FA Q
Q，如何選擇適合的產(chǎn)品？
SMOBIO 蛋白marker 分子量范圍廣、條帶清晰銳利
PM2510符合大多數(shù)使用者需求
小分子選PM2700
大分子選PM2800
Q，為何大分子條帶會(huì)消失不見(jiàn)
跑膠緩沖液遭受蛋白酶(proteinase) 污染，或是buffer reuse 太多次，導(dǎo)致長(zhǎng)菌以致于有proteinase 存在，或是上樣時(shí)反復(fù)使用同一支 tip。
受到污染后蛋白會(huì)從大分子開(kāi)始降解
解決辦法:
1. 上樣時(shí)使用避免反復(fù)使用同一支Tip。
2. 內(nèi)槽使用新鮮配置的跑膠緩沖液。
Q，為何轉(zhuǎn)膜后條帶會(huì)歪斜或消失不見(jiàn)？
膠體與膜之間未緊貼，膠體與膜之間仍有緩沖液
模擬試驗(yàn): 轉(zhuǎn)膜裝置未緊貼
解決辦法:
1. 增加filter paper 張數(shù)(或厚度)à上下各三張
2. 使用滾輪膠體與膜之間氣泡或緩沖液趕走
3. 更換新的海綿墊
Q,為何轉(zhuǎn)膜后高分子條帶消失？
1. >100KDa高分子量蛋白會(huì)需要比較長(zhǎng)的轉(zhuǎn)膜時(shí)間及較高的電壓
2. 緩沖液重復(fù)使用太多次或組成不正確，建議使用新鮮配制的緩沖液
3. 轉(zhuǎn)膜液體可添加0.01?0.1％SDS以促進(jìn)高分子量蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移
在正確轉(zhuǎn)膜條件下，10-310kDa在轉(zhuǎn)膜后都是清晰可見(jiàn)的狀態(tài)
Q,為何小分子條帶 (<5kDa) 會(huì)跑不出來(lái)？
條帶在不同緩沖溶液系統(tǒng)、不同濃度會(huì)有不一樣的分布 (如下圖)，
須根據(jù)需求來(lái)選擇膠的濃度或挑選適合的緩沖溶液系統(tǒng)
? 若<10kDa分子分不開(kāi)，建議使用MES buffer
? 若>100kDa分子分不開(kāi)，建議使用MOPS buffer
Q,為何洗膜后條帶會(huì)變?nèi)趸虿灰?jiàn)
1. 洗膜液體中的Tween20濃度過(guò)高 (建議使用0.05%~1%)
2. 洗膜轉(zhuǎn)速過(guò)高(建議使用25~50 rpm)
| 經(jīng)過(guò)測(cè)試： T牌(箭頭)模糊甚至10kDa消失不見(jiàn)。 SMOBIO洗完后，條帶依然清晰銳利。 |
| 但過(guò)高濃度的Tween 20會(huì)造成整體條帶顏色變淺 |
