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上海源葉生物科技有限公司
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胰蛋白酶解離法檢測HBsAg-CIC
2012-5-12 閱讀(715)
用3．5％PEG選擇性地沉淀血清中CIC，繼之用胰蛋白酶消化沉淀物中的抗體蛋白，分離出抗原部分，用反向間接血凝法測定HBsAg滴度。與不加胰蛋白酶的對照管比較，如HBsAg滴度升高，則說明有HBsAg-CIC的存在。
1．試劑
①pH8．4硼酸鹽緩沖液（BBS）：配制法同*節(jié)中PEG沉淀試驗；
②7％PEG及3．5％PEG溶液：用BBS配制；
③10mg／mL胰蛋白酶溶液：用pH8．2巴比妥緩沖液配制。
2．操作步驟
（1）在測定管與對照管內(nèi)務(wù)加待測血清0．2mL。
（2）兩管各加pH8．4BBSl．8mL，將血清作1：10稀釋。
（3）各加7％PEG 2mL，充分混勻后，4~C冰箱放置18h。
（4）在10％左右條件下2 500r／min離心20min，棄上清
（5）將沉淀物懸浮于4mL 3．5％PEG溶液中，2 500r／rain離心20min，棄上清。
（6）于測定管中加入0．2mL胰蛋白酶溶液，對照管加0．2mLBBS，混勻后置37％水浴30rain，其間振蕩3—4次。取出后，立即置56％水浴5min。
（7）將測定管、對照管及未經(jīng)處理的血清分別作系列倍比稀釋，用反向間接血凝試驗檢測HBsAg滴度。
3．結(jié)果判斷
①測定管HBsAg滴度在1／16以上，且滴度高于對照管1個稀釋度以上者為HBsAg-CIC陽性；
②測定管與對照管HBsAg滴度相同，但其滴度高于血清游離HBsAg1個稀釋度以上者也為HBsAg-CIC陽性。
4．臨床意義 胰蛋白酶解離法檢測HBs-Ag-CIC簡便而敏感，有助于確定乙肝病程中有無抗原特異性復(fù)合物形成，估計是否有可能形成肝外系統(tǒng)病變。
