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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)土壤/植物樣本的處理方法

植物標(biāo)本的精采集及保存

1、 稱取0.1g（誤差±3%以內(nèi)）新鮮植物組織樣本，在液氮中充分研磨；

2、 加入1ml的提取液（80%甲醇）, 置于-20度過夜；

3、 于4度，8000rpm，離心1小時，取上清；

4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%yimi（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈?，保存?zhèn)溆茫?/span>

5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液（1ml定容）。混勻后室溫放置30分鐘，然后4度離心（8000rpm，15分鐘），取上清并暫時保存于4度待用。

6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定：（粗提取）

1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨；

2、 加入樣品體積9倍的提取液（pH 7.4 PBS緩沖液）,3、 請于4度，8000rpm，離心30分鐘，取上清并暫時保存于4度待用。

土壤：稱取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工將標(biāo)本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白，直接取上清檢測，測試細(xì)胞內(nèi)蛋白，要破碎細(xì)胞。

 

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