細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)常需要獲得單克隆，下面就給大家簡(jiǎn)單介紹幾種方法：
方法一：單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)就是這樣的,我現(xiàn)在作了15個(gè)96孔板的單克隆,總共才得到大約50株單克隆在做時(shí)候應(yīng)保證每個(gè)孔中的細(xì)胞是一個(gè),因此,在200毫升的培養(yǎng)液中加入小于96個(gè)的細(xì)胞,這樣平均到每個(gè)孔中因該可以由滿(mǎn)意的結(jié)果培養(yǎng)SPC-A1（人肺癌細(xì)胞），轉(zhuǎn)染了EGFP，然后進(jìn)行了G418抗性篩選和96孔板單克隆篩選，zui終獲得了成功。
方法二：實(shí)驗(yàn)步驟大致為：預(yù)先對(duì)96孔板除*排之外的所有孔加含15%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，0.1ml/孔，并放于細(xì)胞培養(yǎng)箱中溫育，然后胰酶消化穩(wěn)定表達(dá)GFP的細(xì)胞，細(xì)胞液稀釋至密度為1000cell/ml的單細(xì)胞懸浮液，上述細(xì)胞液接種于96孔板的*排，0.2ml/孔，從中吸取0.1ml細(xì)胞溶液接種于第二排，混合后，從第二排中吸取0.1ml接種于第三排……，一直到第八排，zui后一排都丟棄0.1ml細(xì)胞液。一般來(lái)說(shuō)，每一列都會(huì)有某個(gè)孔中只有1~2個(gè)細(xì)胞。
方法三：在顯微鏡下觀察，標(biāo)記孔中小于10個(gè)細(xì)胞的孔，然后在顯微鏡下用記號(hào)筆在皿底把單個(gè)熒光細(xì)胞圈住，然后在操凈臺(tái)里用滅過(guò)菌底牙簽將圈外的細(xì)胞戳死，這樣留在孔中的就是單克隆了，通過(guò)這樣的，獲得了單克隆。但需注意的是：時(shí)間不能超過(guò)30min，否則細(xì)胞極容易死亡。
解決操作時(shí)間長(zhǎng)的方法：拿一個(gè)96板，在里面隨便種一些細(xì)胞，然后用牙簽練習(xí)，我練了5～6次后非常熟練了。還有注意培養(yǎng)液：是含15％的胎牛血清，加大營(yíng)養(yǎng)，有利于細(xì)胞生長(zhǎng)；另外一種方法是對(duì)還沒(méi)有變黃的細(xì)胞液進(jìn)行過(guò)濾，過(guò)濾后的培養(yǎng)含有很多生長(zhǎng)因子，可以作為單克隆的培養(yǎng)液。
