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名稱：線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,

化學名: 線性聚乙烯亞胺,

cas號：9002-98-6

分子量：25KD

用途：用于轉(zhuǎn)染核酸到哺乳動物細胞

產(chǎn)品編號：78002qf01  78002qf02  78002qf03

包裝規(guī)格：1 mL / 50 mL / 500 mL

儲存條件：4℃~8℃密閉保存，可保持穩(wěn)定至少 12 個月，常溫運輸。 ?

產(chǎn)品概述 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物，分子量25000，它能與核酸形成復合物，并使該復合 物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于常見細胞系，如 HEK-293、HEK293T、 Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Sf9 等。該試劑即使在有血清存在的情況下， 它仍然能的將核酸導入細胞。 78bio公司提供的 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點： *的轉(zhuǎn)染效率 , 重組蛋白的高表達水平 ,與含血清的培養(yǎng)基相兼容, 低細胞毒性 ,易于操作 ?

質(zhì)量控制 每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將 eGFP 表達質(zhì)粒（GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-Lv01）用 EndoFectinTM-Plus 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的 HEK-293 細胞，轉(zhuǎn)染 16 h 后， 超過 95%的細胞表達 eGFP。 ?

注意事項

質(zhì)粒質(zhì)量：請務必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)毒素質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度，260 nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度（比值應該在 1.8~2.0 的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測 質(zhì)粒的完整性。

細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果 細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。 ?

瞬時轉(zhuǎn)染方法

1. 接種細胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表 1 所示，每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙 烯管，例如 Falcon  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后zui快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。 請自行確定檢測時間。 ?

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法

1. 接種細胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用胰酶消化細胞并計數(shù)。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表 1 所示，每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙 烯管，例如 Falcon  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后zui快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。

5.轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過一晚。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。 ?

特別提醒

1. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著 提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞 的匯合度仍為 70~80%。

2. 對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是 DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養(yǎng) 基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。

4. 對大多數(shù)細胞來而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL EndoFectinTM 試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。

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